高α-生育酚轉(zhuǎn)基因大豆的培育及純合系選育.pdf

1、生育酚(tocopherol)又稱維生素E,是僅由光合生物合成的一類脂溶性的強抗氧化劑,為人體所必需的維生素之一.在天然存在的4種生育酚中,α-生育酚的生物活性最高且被人體優(yōu)先吸收和利用.植物油是α-生育酚的主要膳食來源,但在大多數(shù)植物油中α-生育酚含量很低而其生物合成前體γ-生育酚含量偏高,這一現(xiàn)象與催化α-生育酚合成反應(yīng)的γ-生育酚甲基轉(zhuǎn)移酶(γ-TMT)在生物體生物活性有關(guān).隨著對生育酚生物合成途徑的進(jìn)一步了解,通過調(diào)控生育酚生物

2、合成過程中關(guān)鍵基因提高α-生育酚含量成為可能.為探索利用基因工程方法提高油料作物種子中的α-生育酚水平,中國科學(xué)院微生物所已從結(jié)球甘藍(lán)(Brassica oleracea L.var.capitata L.)中克隆了γ-生育酚甲基轉(zhuǎn)移酶的全長cDNA序列(命名為BoTMT),并且利用BoTMT構(gòu)建了植物組成型表達(dá)載體pBin-TMTL和種子特異性表達(dá)載體p7S-TMTL,其中載體pBin-TMTL轉(zhuǎn)化大豆獲得成功.本研究在上述工作基礎(chǔ)上

3、開展了兩方面的工作,一方面是利用種子特異性表達(dá)載體p7S-TMTL,以大豆子葉節(jié)為外植體,運用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化大豆,獲得26株抗卡那霉素再生植株.PCR檢測結(jié)果表明其中4株為陽性,初步證明γ-TMT已轉(zhuǎn)化進(jìn)大豆基因組中.另一方面是對以植物組成型表達(dá)載體pBin-TMTL轉(zhuǎn)化得到的轉(zhuǎn)BoTMT大豆T1、T2代進(jìn)行PCR、Western blot檢測.結(jié)果顯示BoTMT在轉(zhuǎn)基因大豆后代中能正常遺傳和有效表達(dá).轉(zhuǎn)基因大豆與其相應(yīng)的野生型大豆在