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1、中國科學(xué)院海洋研究所博士學(xué)位論文四種海藻熱休克蛋白70(HSP70)基因的克隆與表達(dá)分析姓名:付萬冬申請學(xué)位級別:博士專業(yè):海洋生物學(xué)指導(dǎo)教師:段德麟20090603付萬冬四種海藻熱休克蛋白70(HSP70)基因的克隆與表達(dá)分析中科院海洋研究所博十學(xué)位論文海帶HSP70mRNA表達(dá)量呈先上升后下降趨勢。熱激1h后海帶HSP70mRNA表達(dá)量迅速上升,熱激7h后mRNA表達(dá)量達(dá)到最大,是對照組表達(dá)量的4倍。不同鹽度(O‰45‰)脅迫處理組
2、中,09/00或59/00鹽度處理組的海帶HSP70mRNA表達(dá)量是309/00鹽度處理組海帶HSP70mRNA表達(dá)量的3倍。35‰、40‰和459/00鹽度處理組之間HSP70mRNA表達(dá)量較低且無顯著差異。不同熱激溫度(540℃)處理組中,20℃或25℃處理的孔石莼HSP70mRNA表達(dá)量較低,而5℃、35℃、或40℃處理組的孔石莼HSP70mRNA的表達(dá)量是25℃處理組孔石莼HSP70mRNA表達(dá)量的2倍以上。30℃不同熱激時(shí)間(
3、012h)處理組中,孔石莼HSP70mRNA表達(dá)量也呈先上升后下降趨勢。熱激5h后孔石莼HSP70mRNA表達(dá)量達(dá)到最大,是對照組的35倍。不同鹽度(09/00459/00)脅迫處理組中,0%o或59/00鹽度處理組的孔石莼HSP70mRNA表達(dá)量是309/00鹽度處理組孔石莼HSP70表達(dá)量的3倍。30‰、409/00和459/00鹽度處理組孔石莼HSP70mRNA表達(dá)量較低,且無顯著差異。不同紫外線照射時(shí)間(O40h)和不同干燥時(shí)間
4、(040h)處理組中,孔石莼HSP70mRNA表達(dá)量都在3h后達(dá)到最高值,之后表達(dá)量維持在較高水平。為進(jìn)一步研究藻類HSP70的生物學(xué)功能,將海帶HSP70基因的開放閱讀框區(qū)域克隆到表達(dá)載體pEASYE2中,并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)pLysS。將陽性重組子培養(yǎng)于含有√6岣(100U/,mL)的LB培養(yǎng)基,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDSPAGE電泳鑒定。經(jīng)5h誘導(dǎo),其表達(dá)量達(dá)到平臺期,繼續(xù)培養(yǎng)HSP70表達(dá)量并不顯著增高。5mMIPT
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