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1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文重組酶刪除載體的構(gòu)建及其在動(dòng)物細(xì)胞中的應(yīng)用姓名:汪亮申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):動(dòng)物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師:劉娣20090620東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)碩士學(xué)位論文IIConstructrecombinasevectapplicationintheanimalcellsAbstractWiththedevelopmentapplicationoftransgenictechnologydespiteitsgreatpoten
2、tialbenefititsnegativeeffectsgraduallyattractmemeattention..Asaimptanttechnologyfprolonginghumanlifespantransgenicanimalsfgantransplantationattractedawidespreadattentionhoweveritssafetyshouldneverbeneglected.Pigisanimpta
3、ntanimalmodelfgantransplantationresearchfthegreatsimilaritybetweenhumanpiginphysiology.ThepresentresearchesfocusonthedongandonanimalsofSwinepcinekidneybyitsparticularity.Afterobtainthecloningproducts,theproblemthattheexo
4、genousgeneespeciallymarkerreptergeneshouldbesaveddismissedattractsmanyresearcher’sresearchinterest.Itsnecessarytotheexogenousgeneindertominimizetheriskofpotentialfromthemarkerreptergenes.Thisexperimenttrytoconstructaplas
5、whichcontainstherecombinaserecognitionsitesbyusingthesitespecificrecombinationsystemtoverifythedeletioneffectsinanimalcells.Themainresultsincludes:(1)Basedonthetestrequiredwedesignedasequencethatcontainsthemultipleclonin
6、gsitesinthedlethedoublerecombinase(CreFLP)recognitionsiteonbothendobtainedthetargetfragmentwith211bpfulllengthbyoverlapextensionPCR(SOEPCR)thenthetargetfragmentwasclonedintopMD18TSimplebackbonevect(2)TakingpCDNA3.1pEGFPN
7、3pIRESplasasatemplatemarkerreptergeneswereamplified:includingneomycinresistance(neomycin)geneEnhancedgreenfluescentprotein(EGFP)genestrongpromoter(CMV)genethesequenceofinternalribosomeentrysite(IRES)(3)thetwomarkerrepter
8、genes(NeomycinEGFP)wereconnectedtothebackbonevectfexpressiondifferentproteinrespectivelycoexpressionofthetwoproteinbyIRESsystem.(4)Asthetwovectbackbonesfromthestep(3)wetheCrerecombinaserecognitionsiteobtainanothertwodiff
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