傳染性法氏囊病病毒上海超強(qiáng)毒株的分子特征及分子免疫研究.pdf

1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文傳染性法氏囊病病毒上海超強(qiáng)毒株的分子特征及分子免疫研究姓名：孫建和申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：陸蘋20031208上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文V接種的臨床癥狀病理變化分析具IBD典型的臨床癥狀和特征性病變發(fā)病率達(dá)70%死亡率達(dá)40%病毒分離純化動(dòng)物回歸血清學(xué)檢測(cè)及病毒核酸分離純化表明病原為IBDV進(jìn)一步對(duì)該毒株VP2基因進(jìn)行擴(kuò)增克隆與測(cè)序通過(guò)對(duì)高變區(qū)基因的分析比較發(fā)現(xiàn)該毒株具有大多數(shù)超強(qiáng)毒株

2、所具有的分子特征在關(guān)鍵位點(diǎn)上與非超強(qiáng)毒株存在明顯差異在第1個(gè)親水區(qū)上即222位的氨基酸殘基由弱毒株的P突變?yōu)锳在第294和299位氨基酸殘基分別由L和N突變?yōu)镮和S在超強(qiáng)毒株這3個(gè)氨基酸通常導(dǎo)致毒株的親和性發(fā)生變化從而導(dǎo)致毒力大大增強(qiáng)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)該毒株七肽區(qū)的氨基酸是保守的為SWSASGS而非弱毒株的SWSARGT且279位和284位氨基酸分別是D和A七肽區(qū)的保守性以及279D和284A兩個(gè)特征性氨基酸是強(qiáng)毒株的兩個(gè)重要標(biāo)志此外256

3、位為I而非弱毒株的V等這些特征從分子水平上說(shuō)明IBDV上海分離株具備傳染性法氏囊病病毒超強(qiáng)毒(vvIBDV)的分子特征確認(rèn)上海地區(qū)以發(fā)病日齡早發(fā)病率死亡率高為特征的雞傳染病由傳染性法氏囊病病毒超強(qiáng)毒株所致該毒株命名為SH95抽提獲得高純度的病毒dsRNA是成功進(jìn)行RTPCR和cDNA合成的關(guān)鍵本文對(duì)vvIBDVdsRNA的純化方法進(jìn)行了研究用分離純化的IBDV上海超強(qiáng)毒株攻擊4周齡的非免疫雞用超速離心法從感染雞的法氏囊中分離純化IBDV