雞傳染性法氏囊病病毒地方株基因變異分析及防制研究.pdf

1、為探究近年來(lái)IBD呈現(xiàn)新特點(diǎn)的原因,澄清10年來(lái)洛陽(yáng)地區(qū)IBDV基因是否發(fā)生了變異及變異的程度,以更好地作好該地區(qū)IBD的防制工作,該研究從以下幾個(gè)方面進(jìn)行了IBDV的基因變異分析及防制技術(shù)研究:1、對(duì)收集于洛陽(yáng)地區(qū)1991年和2001年、前后間隔達(dá)10年之久的兩個(gè)時(shí)期的8份IBD病料進(jìn)行了病毒的分離鑒定、VP<,2>基因的克隆與序列分析.結(jié)果發(fā)現(xiàn),8個(gè)地方流行株雖均屬于IBDV超強(qiáng)毒株,但各個(gè)毒株間也有一定的差異.根據(jù)它們的核苷酸和氨

2、基酸同源性高低可明顯分為三群,分別位于系統(tǒng)進(jìn)化樹上超強(qiáng)毒區(qū)的三個(gè)小分支上.第一群包括1991年分離的L912、L914和L916三株;第二群包括L913、L017和L018三株;第三群包括2001年分離的L015和L016二株.群內(nèi)各毒株間同源性較高,在98.3﹪-100﹪之間;群間各毒株的同源性則相對(duì)較低,在95﹪-97.9﹪之間,其中最低的為L(zhǎng)015和L017、L016和L018二對(duì),同源性均只有95﹪.進(jìn)一步的序列分析表明,8個(gè)地

3、方分離株均具有vvIBDV所具有的特征.其中,1991年分離的4株在各親水區(qū)和七肽區(qū)的氨基酸和經(jīng)典株及傳統(tǒng)的超強(qiáng)毒株相比均無(wú)明顯的變化;而2001年的4個(gè)分離株雖仍符合超強(qiáng)毒株的特點(diǎn),但在相應(yīng)親水區(qū)均有1-2個(gè)氨基酸發(fā)生替換,特別是L015和L016株還出現(xiàn)了4個(gè)包括10個(gè)參考毒株在內(nèi)的其它各毒株均沒(méi)有的氨基酸位點(diǎn)變化.2、在以上工作的基礎(chǔ)上,篩選了二株地方代表株分別制備了囊毒和胚毒二價(jià)滅活油乳苗,并分別檢測(cè)、比較了其免疫效果.結(jié)果表明

4、,所制備的囊毒滅活苗免疫效果顯著優(yōu)于胚毒滅活苗和活疫苗,在接種后的各個(gè)時(shí)期(除第10天外)所產(chǎn)生的AGP抗體效價(jià)均顯著高于其它二種疫苗免疫雞(P<0.01),最高AGP效價(jià)可達(dá)4.8log2,至接種后第90天時(shí),仍具有1.8log2的AGP抗體效價(jià);胚毒苗免疫效果雖然差于囊毒苗,但明顯優(yōu)于活疫苗,其最高AGP效價(jià)可達(dá)3log2,當(dāng)活苗免疫組雞血清中已無(wú)可測(cè)性抗體時(shí),胚苗組仍具有1.0log2的AGP效價(jià).在接種后第60天時(shí)分別應(yīng)用IBD

5、V標(biāo)準(zhǔn)毒、地方超強(qiáng)毒L015和L017所進(jìn)行的攻毒試驗(yàn)中,囊苗免疫組雞均100﹪地獲得了保護(hù);胚苗組雞對(duì)這三種強(qiáng)毒株的攻擊,也均可獲得80﹪的保護(hù),二種由地方毒株所制備的疫苗均未呈現(xiàn)出對(duì)不同毒株抵抗性的不同;而活疫苗組在攻毒試驗(yàn)中,對(duì)不同毒株的攻擊保護(hù)率均較低,分別只有53.3﹪、40﹪和46.7﹪,呈現(xiàn)出了一定的差異性;在大田試驗(yàn)中,所制備的地方株囊毒和胚毒滅活油乳苗與其它活苗聯(lián)合應(yīng)用,保護(hù)率分別可達(dá)100﹪和98﹪以上.3、該研究在

6、國(guó)內(nèi)首次從新城疫Ⅰ系病毒接種的雞胚脾細(xì)胞中擴(kuò)增出了雞IL-18全基因,并進(jìn)行了序列測(cè)定.在此基礎(chǔ)上,利用上游引物設(shè)計(jì)的HindⅢ酶切位點(diǎn)和pMD18-T載體上的Xba 1酶切位點(diǎn),將雞IL-18基因定向克隆至pcDNA3載體的相應(yīng)位點(diǎn),從而構(gòu)建了雞IL-18基因真核表達(dá)載體,并首次將其應(yīng)用于IBD的防制中,觀察了其對(duì)IBD胚毒滅活苗的免疫增強(qiáng)效果.結(jié)果表明,同接種IL-18真核表達(dá)質(zhì)粒與IBD滅活苗的試驗(yàn)雞所產(chǎn)生的中和抗體效價(jià)雖然在接種

7、后的前21天內(nèi)與單純疫苗組相比無(wú)明顯差異(P>0.05),但在接種第28天后,二組中和抗體效價(jià)均呈現(xiàn)了明顯差異(P<0.05);其T、B淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)也基本上強(qiáng)于單純疫苗組,尤其是T淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)從接種后第21天開始即明顯強(qiáng)于單純疫苗接種組(P<0.05);接種后第42天時(shí)進(jìn)行的攻毒試驗(yàn)結(jié)果表明,同時(shí)接種IL-18表達(dá)質(zhì)粒的試驗(yàn)組雞獲得93.7﹪的保護(hù),而單純疫苗接種組的保護(hù)率只有86.7﹪.足以證明,雞IL-18真核表達(dá)質(zhì)粒在