利用農桿菌通過花器浸蘸法轉化小麥的研究.pdf

1、根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)已被廣泛用于雙子葉植物遺傳轉化,但是卻比較難以轉化單子葉植物特別是具有重要經濟值的小麥、玉米和水稻等.農桿菌介導擬南芥轉化的花器浸蘸法(floral dip)是當前不需要組織培養(yǎng)或植株再生的最簡單的轉化方法.我們將該方法應用于小麥的轉化,通過GUS報告基因系統詳細的探討了影響GUS瞬時表達頻率的因素,并有分子證據表明外源基因已經整合進小麥的基因組中,初步建立了通過花器浸蘸法

2、利用農桿菌轉化小麥的體系.在該研究中,農桿菌菌株LBA4404(pTOK233)有徠對處于花期的小麥穗部進行浸蘸處理,其含有一超雙元載體pTOK233,在其T-DNA區(qū)攜帶有gus報告基因和潮霉素磷酸轉移酶基因(hpt),我們在不同處理條件下對小麥花器的GUS瞬時表達頻率進行了研究,并根據GUS的瞬時表達頻率確立了適宜的接種條件.結果表明,適宜的接種時期應在小麥開花前2天至剛見花;接種菌液的OD600值應0.75至0.9之間;接種菌液的