花器噴霧法接種根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化矮生菜豆條件的初步探索.pdf

1、通過對農(nóng)桿菌在矮生菜豆花器中的存活狀況、vir基因的表達(dá)情況、T-DNA的轉(zhuǎn)移情況的研究,初步探討了該方法在農(nóng)桿菌介導(dǎo)的矮生菜豆的遺傳轉(zhuǎn)化中的可行性.為了更好的研究花器噴霧法的可行性,我們首先利用針刺注射花器的方法保證接種菌液進(jìn)入到花器中去,對不同接種時期、不同接種菌液條件下的農(nóng)桿菌存活、vir基因表達(dá)情況進(jìn)行了研究.研究表明,接種的六個時期農(nóng)桿菌存活都很好,vir基因表達(dá)水平也很高;接種菌液濃度(OD<,600>值表示)為0.8-1.

2、3時,vir基因表達(dá)最好;糖類物質(zhì)以及細(xì)胞分裂素BAP能夠大大提高vir基因的表達(dá)水平,其中蔗糖的效果比葡萄糖好;接種菌液中是否加入乙酰丁香酮AS對vir基因的表達(dá)水平?jīng)]有影響.我們進(jìn)一步利用在T-DNA上含有GUS基因的農(nóng)桿菌菌株LBA4404(pTOK233)研究最佳接種時期,結(jié)果表明,最佳接種時期應(yīng)在授粉之前,菜豆花現(xiàn)蕾的第一天到第二天.花器噴霧法轉(zhuǎn)化植物的難點在于接種菌液能否進(jìn)入到花器中去,并到達(dá)靶標(biāo)位置.研究表明表面活性劑可對