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1、產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens),又稱魏氏梭菌,存在于很多健康動(dòng)物的腸道中,當(dāng)飼養(yǎng)和環(huán)境條件改變時(shí),可引起畜禽的的產(chǎn)氣莢膜梭菌病,一旦發(fā)病,會(huì)導(dǎo)致畜禽迅速死亡,病程極短,往往在未得到有效治療前便死亡。近年來產(chǎn)氣莢膜梭菌病已經(jīng)致使養(yǎng)殖業(yè)遭受巨大經(jīng)濟(jì)損失。
其中A型產(chǎn)氣莢膜梭菌是引起家兔腹瀉性腸炎的主要致病菌,該菌在腸道內(nèi)繁殖產(chǎn)生α毒素導(dǎo)致家兔發(fā)病。此類病的發(fā)病急、死亡率高、發(fā)病后用藥治療效果不明顯,
2、因此為了有效預(yù)防和控制產(chǎn)氣莢膜梭菌病的發(fā)生,研制高效、安全的類毒素疫苗和評(píng)價(jià)其效力刻不容緩。ELISA方法,具有特異、敏感、迅速、可以大批量檢測(cè)抗體的優(yōu)勢(shì),可用于檢測(cè)和診斷產(chǎn)氣莢膜梭菌病,也可應(yīng)用于疫苗保護(hù)效果的評(píng)價(jià)及流行病學(xué)調(diào)查。
本研究對(duì)A型產(chǎn)氣莢膜梭菌標(biāo)準(zhǔn)菌種(NCTC528)進(jìn)行復(fù)蘇、增菌、產(chǎn)毒,得到以α毒素為主的外毒素溶液。將制備的外毒素通過甲醛滅活,與白油佐劑混合乳化后,成功制備了A型產(chǎn)氣莢膜梭菌類毒素疫苗;另一方
3、面;將外毒素經(jīng)過過濾除菌,飽和硫酸銨沉淀等方法對(duì)外毒素蛋白進(jìn)行提取。以毒素蛋白作為間接ELISA的包被抗原,摸索優(yōu)化反應(yīng)條件,最終建立了產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素抗體檢測(cè)的間接ELISA方法。運(yùn)用該方法對(duì)免疫過疫苗的家兔進(jìn)行抗體水平的連續(xù)監(jiān)測(cè),以此來確定疫苗的最小免疫劑量和合理的免疫程序。
疫苗臨床保護(hù)效果的評(píng)價(jià)試驗(yàn):將疫苗分為4個(gè)不同的劑量,分別對(duì)28日齡和45日齡的家兔各400只首免,28日齡家兔長(zhǎng)至45日齡時(shí)對(duì)家兔進(jìn)行二免;通過攻
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