玉米轉(zhuǎn)ABP9和ZmCBF3基因植株的獲得與分子鑒定.pdf

1、干旱、高鹽、低溫等非生物逆境嚴(yán)重影響植物的生長發(fā)育和農(nóng)作物的產(chǎn)量。植物對非生物逆境的響應(yīng)，受一個由多條途徑組成復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)調(diào)控，深入剖析該調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，對應(yīng)用基因工程技術(shù)來提高農(nóng)作物的抗逆性具有重要意義。玉米作為重要的糧食作物，抗旱性較差，在水資源嚴(yán)重短缺的今天，借助分子育種學(xué)方法提高玉米的抗旱性，對于保障我國糧食生產(chǎn)安全具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　本實(shí)驗(yàn)室通過前期的工作分離得到了玉米逆境誘導(dǎo)基因ABP9和ZmCBF3，并通過后續(xù)的研究證明

2、這兩個基因具有全面提高植物對各種非生物逆境耐受性的功能。為了進(jìn)一步研究這兩個基因在玉米抗逆生理活動中發(fā)揮的作用以及他們之間的聯(lián)系，需要獲得一系列轉(zhuǎn)ABP9和ZmCBF3基因的玉米植株。
　　本論文的研究工作主要包括以下幾方面:
　　1、克隆了玉米rab17基因的啟動子，用于構(gòu)建包含APB9基因和ZmCBF3基因的載體，加上本實(shí)驗(yàn)室之前已有的部分載體，形成了一系列包含這兩個基因的組成型、誘導(dǎo)型、單基因、雙基因表達(dá)載體，并將這些

3、載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌得到了玉米轉(zhuǎn)基因所需的工程菌。
　　2、通過基因槍法、農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化幼穗法、農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化幼胚法，三種方法轉(zhuǎn)化玉米，轉(zhuǎn)化使用的玉米野生型為齊-319。
　　3、對轉(zhuǎn)基因玉米T1代植株進(jìn)行篩選和分子鑒定，順序使用了田間草銨膦噴灑——PCR擴(kuò)增——Southern Blot——Western Blot——Northern Blot的方法，最終獲得了一株轉(zhuǎn)pCAMBIA3301-Pabp9-ZMCBF3-ADH1-P