利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和基因槍法獲得轉(zhuǎn)BRi基因玉米材料.pdf

1、基因工程和轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展，克服了傳統(tǒng)雜交育種方式的不足，為種質(zhì)資源的創(chuàng)新和作物品質(zhì)改良提供了新的思路和方法。農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和基因槍法是玉米遺傳轉(zhuǎn)化的主要方法。本試驗(yàn)采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和基因槍法對(duì)18－599、齊319、A188和昌7-2四個(gè)玉米自交系幼胚誘導(dǎo)的Ⅱ型愈傷組織進(jìn)行了BRi基因的遺傳轉(zhuǎn)化。主要結(jié)果如下：
　　 1.玉米幼胚愈傷組織受體系統(tǒng)建立受基因型影響。四個(gè)供試玉米自交系18－599、齊319、A188和昌7-2的幼胚

2、都能誘導(dǎo)產(chǎn)生Ⅱ型愈傷組織。其中，18－599所獲愈傷組織質(zhì)量好數(shù)量多，適于轉(zhuǎn)化；齊319和昌7－2愈傷顆粒松散，質(zhì)地硬，愈傷質(zhì)量不高；A188愈傷組織呈白色，顆粒較松散，具有一定的數(shù)量。生根壯苗培養(yǎng)基中生根粉濃度為1.5mg·L-1時(shí)生根效果最好。
　　 2.浸染強(qiáng)度是影響農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化效率的重要因素之一。對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法浸染時(shí)間和菌液濃度的參數(shù)優(yōu)化研究表明，18－599的最佳浸染強(qiáng)度為OD600=0.6，10min，齊319的最佳浸

3、染強(qiáng)度為OD600=0.4，20min。
　　 3.在基因槍轉(zhuǎn)化過程中，愈傷組織的預(yù)處理方式、鎢粉用量、質(zhì)粒濃度均對(duì)轉(zhuǎn)化率產(chǎn)生影響。愈傷組織先干燥2h，再高滲處理2h的轉(zhuǎn)化率比單純高滲處理高；鎢粉濃度為100μg/槍時(shí)轉(zhuǎn)化率高且節(jié)省成本；質(zhì)粒濃度為1.5μg/槍時(shí)的轉(zhuǎn)化率高。
　　 4.通過分子檢測(cè)證明已經(jīng)獲得陽性轉(zhuǎn)化植株。在農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化株的PCR檢測(cè)中，94株A188轉(zhuǎn)化苗中有22株為陽性植株，轉(zhuǎn)化率23.4％；20