柑橘轉(zhuǎn)GFP、AP1和LFY基因植株群體的分子鑒定與基因表達(dá)研究.pdf

1、分類號(hào)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文柑橘轉(zhuǎn)G萬(wàn)尸、A尸1和LFY基因植株群體的分子鑒定與基因表達(dá)研究MoleeulareharaeteriZationandgeneexPressionstudyoftransgeniePlantsoverexPressingGFP，APIorLFYgenesincitrus博士研究生:范凈指導(dǎo)教師:郭文武教授指導(dǎo)小組:鄧秀新教授劉繼紅教授徐娟副教授程運(yùn)江副教授專業(yè):果樹學(xué)獲得學(xué)位名稱:農(nóng)學(xué)博士研究方向:生物技

2、術(shù)獲得學(xué)位時(shí)間:2010年華中農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝林學(xué)學(xué)院二O一O年五月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2010屆博士研究生學(xué)位論文2.2.7植物總RNA提取...............................................，……312.2.8cDNA第一鏈合成............................................................................……332.2.9半定量R

3、TPCR檢測(cè)........................................................................……332.2.10Real一timeRl飛PCR分析..........................................……，...................……332.2.11Real一timePCR分析外源基因相對(duì)拷貝數(shù)..................

4、....................……342.2.12Nthemblot檢測(cè)............................................................................……353.結(jié)果與分析............................................................................................

5、..................……373.1轉(zhuǎn)G廠尸柑橘外源基因表達(dá)的分析......................................……、.……，.....……373.1.1轉(zhuǎn)G廠’P柑橘的Southem雜交分析...................................................……373.1.1.1轉(zhuǎn)G萬(wàn)尸基因佛羅斯特臍橙的Southem雜交…，................

6、...……373.1.1.2轉(zhuǎn)基因改良橙與尾張有性雜種的G廠尸基因Southem雜交..…383.1.1.3轉(zhuǎn)G萬(wàn)尸基因冰糖橙的Southem雜交...................................……423.1.2轉(zhuǎn)GFP柑橘的熒光檢測(cè)...................................................................……453.1.2.1轉(zhuǎn)G廠尸基因佛羅斯特臍橙的熒

7、光檢測(cè).....……，...................……453.1.2.2轉(zhuǎn)GFP基因改良橙與尾張有性雜種的熒光檢測(cè)...............……453.1.2.3轉(zhuǎn)GFP基因冰糖橙的熒光檢測(cè)...........................................……473.1.3反向PCR分析轉(zhuǎn)G萬(wàn)尸柑橘的TDNA重復(fù)...................................……483.1.3.1

8、轉(zhuǎn)GFP基因改良橙與尾張有性雜種的反向PCR分析......……483.1.3.2轉(zhuǎn)G萬(wàn)尸基因冰糖橙的反向PCR分析…，..............................……503.1.4轉(zhuǎn)G尸尸柑橘外源基因的表達(dá)分析...................................................……513.1.4.1轉(zhuǎn)G萬(wàn)尸基因改良橙與尾張有性雜種的外源基因表達(dá)分析..…513.1.4.2轉(zhuǎn)G廠尸基因冰

9、糖橙的外源基因表達(dá)分析...........................……533.1.5轉(zhuǎn)GFP柑橘外源基因和355的甲基化分析...................................……553.1，5.1轉(zhuǎn)GFP基因改良橙與尾張有性雜種的甲基化分析...........……553.1.5.2轉(zhuǎn)G萬(wàn)尸基因冰糖橙的甲基化分析.............……，...................……573.2轉(zhuǎn)A尸了柑橘

10、外源基因拷貝數(shù)分析...................................……，...................……593.2.1轉(zhuǎn)A尸]基因的茶枝柑Southem雜交分析..............……，...................……593.2.2轉(zhuǎn)A尸]碰柑的拷貝數(shù)分析...............……，..........................................……603.2

11、.2.1轉(zhuǎn)API基因碰柑的Southem雜交.............……，...................……603.2.2.2Real一timePCR分析轉(zhuǎn)A尸I基因檢柑外源基因相對(duì)拷貝數(shù)..…6333轉(zhuǎn)A尸了金柑的內(nèi)源開花相關(guān)基因表達(dá)分析............................................……683.3.1轉(zhuǎn)A尸j基因金柑的Southem雜交........................