AP1基因轉(zhuǎn)化雙單倍體小黑楊及其數(shù)字基因表達(dá)譜分析.pdf

1、楊樹是重要的工業(yè)和經(jīng)濟(jì)用材林樹種之一，是林木研究中的模式植物。眾多研究發(fā)現(xiàn)楊樹具有相對(duì)較長(zhǎng)的童期，而許多性狀在成年期才能表現(xiàn)出來(lái)。因此，促進(jìn)楊樹提早開花，縮短其幼年期成為林木育種學(xué)者的研究熱點(diǎn)。近年來(lái)，許多花發(fā)育相關(guān)基因在植物中的成功轉(zhuǎn)化，為研究人員通過(guò)基因轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)來(lái)改造植物花期奠定了基礎(chǔ)。已有研究表明轉(zhuǎn)APETALA1(AP1)基因的擬南芥和金魚草表現(xiàn)出明顯的早花性，但該基因在楊樹中過(guò)表達(dá)的研究鮮有報(bào)道，并且楊樹轉(zhuǎn)基因的研究多是以雜合

2、二倍體為基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)室已往碩士研究生通過(guò)花藥培養(yǎng)，獲得B6楊（B6楊是小黑楊雌株天然授粉而得的二倍體雄株）單倍體植株。單倍體小黑楊繼代培養(yǎng)多次后，體細(xì)胞染色體自發(fā)加倍，形成純合的二倍體，稱之為雙單倍體。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期培養(yǎng)觀察，發(fā)現(xiàn)雙單倍體和二倍體小黑楊外觀形態(tài)上存在差異。本論文的目的是利用實(shí)驗(yàn)室已有的從杞柳中克隆出的AP1基因構(gòu)建植物表達(dá)載體，獲得小黑楊雙單倍體和二倍體轉(zhuǎn)基因植株;采用高通量測(cè)序技術(shù)分析雙單倍體和二倍體小黑楊組培苗葉片和莖尖的

3、基因表達(dá)情況，進(jìn)一步分析轉(zhuǎn)基因株系的外觀形態(tài)差異的原因;含GUS基因的XVE化學(xué)誘導(dǎo)型植物表達(dá)載體的構(gòu)建，確定雙單倍體小黑楊中能夠誘導(dǎo)目的基因表達(dá)的最適雌激素濃度。
　　論文主要取得成果如下:
　　1，構(gòu)建2×35S∷AP1 pB2SM，35S∷GUS PER10植物過(guò)表達(dá)載體，獲得小黑楊雙單倍體和二倍體轉(zhuǎn)基因植株。觀察轉(zhuǎn)基因植株的表型:雙單倍體小黑楊導(dǎo)入AP1基因后出現(xiàn)早花性狀，且開花后的雙單倍體小黑楊15天左右開始枯萎，