轉(zhuǎn)TabZIP基因小黑楊的獲得及抗逆性分析.pdf

1、本研究利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將從極度抗旱、耐鹽植物檉柳中克隆得到的TabZIP基因?qū)胄『跅罨ǚ壑仓昊蚪M中，然后對(duì)轉(zhuǎn)基因小黑楊和非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招『跅罱M培苗進(jìn)行鹽、重金屬、旱脅迫處理，比較它們抗性的強(qiáng)弱，篩選出抗性優(yōu)良的轉(zhuǎn)基因株系。
　　通過(guò)對(duì)小黑楊花粉植株的遺傳轉(zhuǎn)化，共獲得3株卡那霉素抗性芽，對(duì)其進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果均為陽(yáng)性;進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示目的基因在3個(gè)株系中均有表達(dá)量，說(shuō)明外源基因在RNA水平上得到表達(dá);進(jìn)

2、一步對(duì)3個(gè)轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行Western雜交分析，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因株系在16.5Ku處均出現(xiàn)抗TabZIP抗體特異性雜交譜帶，表明3個(gè)轉(zhuǎn)基因小黑楊組織細(xì)胞中均有TabZIP基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物。
　　分別對(duì)3個(gè)轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行了NaCl脅迫、重金屬和干旱脅迫處理，比較逆境脅迫條件下轉(zhuǎn)基因小黑楊與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ招『跅顭o(wú)根組培苗高生長(zhǎng)、葉片數(shù)、傷害指數(shù)、根生長(zhǎng)等指標(biāo)及鹽脅迫后組培苗葉片分化的出芽率、葉片傷害指數(shù)，結(jié)果表明，無(wú)根組培苗用0.8％N

3、aCl處理20d后，除了葉片數(shù)各株系間無(wú)顯著差異外，各轉(zhuǎn)基因株系無(wú)論是相對(duì)高生長(zhǎng)還是生根指數(shù)均顯著大于非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩晗担瑐χ笖?shù)均顯著小于非轉(zhuǎn)基因株系，對(duì)照的相對(duì)生長(zhǎng)量是11.6％，轉(zhuǎn)基因小黑楊的平均相對(duì)生長(zhǎng)量為84.8％，轉(zhuǎn)基因小黑楊生根指數(shù)高于對(duì)照約1.64倍，傷害指數(shù)小于對(duì)照71.4％;轉(zhuǎn)基因株系組培苗葉片在0.6％ NaCl處理后，出芽率高于對(duì)照株系21.3％，葉傷害指數(shù)低于對(duì)照60.2％。以上說(shuō)明，鹽脅迫條件下轉(zhuǎn)基因小黑楊受害

4、程度明顯小于對(duì)照，抗鹽能力有所增強(qiáng)。
　　0.2mmol/LCu2+脅迫30d后，轉(zhuǎn)基因小黑楊平均高度高于對(duì)照31.1％，相對(duì)生長(zhǎng)量和葉片數(shù)量與對(duì)照達(dá)到顯著性差異，分別大于對(duì)照6.1倍和32.7％，傷害指數(shù)與對(duì)照也達(dá)到顯著性差異，小于對(duì)照29.8％，生根指數(shù)除TB3與對(duì)照無(wú)顯著性差異外，其它2個(gè)株系皆顯著大于對(duì)照，平均生根指數(shù)大于對(duì)照1.93倍，分析說(shuō)明TabZIP基因增強(qiáng)了小黑楊對(duì)重金屬脅迫的抵抗能力。
　　無(wú)根組培苗用5

5、％PEG6000處理30d后，轉(zhuǎn)基因小黑楊平均高度高于對(duì)照18.7％，相對(duì)生長(zhǎng)量更是明顯大于對(duì)照，平均葉片數(shù)轉(zhuǎn)基因株系TB3最少，為6.77，對(duì)照次之，為7.33，TB1、TB2分別是8.33和8.50，傷害指數(shù)轉(zhuǎn)基因株系低于對(duì)照29.6％，且平均根長(zhǎng)是對(duì)照的2.78倍，生根指數(shù)也均大于對(duì)照，所以TabZIP基因的導(dǎo)入也提高了小黑楊的抗旱能力。
　　綜合以上結(jié)果，TabZIP基因的表達(dá)能夠不同程度提高轉(zhuǎn)基因小黑楊的抗鹽、抗重金屬及