轉(zhuǎn)mAM79基因玉米的獲得及草甘膦抗性分析.pdf

1、來(lái)源于細(xì)菌的EPSPS編碼基因AM79 aroA可用于培育抗草甘膦轉(zhuǎn)基因作物。實(shí)驗(yàn)室前期工作對(duì)AM79 aroA基因進(jìn)行了人工改造合成，合成的基因命名為mAM79。本研究對(duì)實(shí)驗(yàn)室前期獲得的轉(zhuǎn)mAM79基因玉米材料進(jìn)行了分子鑒定及草甘膦抗性分析。同時(shí)為了獲得更多的具有不同插入位點(diǎn)的轉(zhuǎn)基因事件，本研究將mAM79基因表達(dá)框插入到玉米Ds轉(zhuǎn)座子元件中，構(gòu)建了植物表達(dá)載體p3301-ZmDs-UbiSpAM79，將此載體轉(zhuǎn)化玉米，獲得了轉(zhuǎn)基因玉

2、米植株，并對(duì)轉(zhuǎn)基因植株的草甘膦抗性進(jìn)行了初步分析。主要研究結(jié)果包括:
　　1、對(duì)實(shí)驗(yàn)室前期獲得的轉(zhuǎn)基因玉米株系進(jìn)行PCR分析，結(jié)果表明mAM79基因已經(jīng)整合到了這些轉(zhuǎn)基因玉米株系的基因組中。RT-PCR分析結(jié)果表明，mAM79基因在7個(gè)獨(dú)立的轉(zhuǎn)基因玉米株系中都有較高的轉(zhuǎn)錄水平。但是，Western blot分析結(jié)果表明，7個(gè)獨(dú)立的轉(zhuǎn)基因玉米株系中AM79 EPSPS蛋白水平有很大的差異，其中AM85和AM72這兩個(gè)株系的AM79

3、EPSPS蛋白表達(dá)量顯著高于其它株系。田間噴施4倍濃度的草甘膦時(shí)，這兩個(gè)轉(zhuǎn)基因株系能夠正常生長(zhǎng)，其它轉(zhuǎn)基因玉米植株的生長(zhǎng)均受到影響，而非轉(zhuǎn)基因玉米均死亡。研究結(jié)果表明mAM79基因可以用于培育抗草甘膦轉(zhuǎn)基因玉米，并且獲得的轉(zhuǎn)基因玉米株系可以作為培育抗草甘膦轉(zhuǎn)基因玉米的重要材料。
　　2、將mAM79基因表達(dá)框插入到玉米Ds轉(zhuǎn)座子元件中，構(gòu)建了植物表達(dá)載體p3301-ZmDs-UbiSpAM79，并將此植物表達(dá)載體通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)

4、化玉米，獲得5個(gè)轉(zhuǎn)基因玉米株系。對(duì)T1代轉(zhuǎn)基因植株的PCR分析結(jié)果表明，mAM79基因已經(jīng)整合到了這些轉(zhuǎn)基因玉米株系的基因組中。RT-PCR的分析結(jié)果表明，5個(gè)獨(dú)立的轉(zhuǎn)基因玉米株系中mAM79基因都有較高的轉(zhuǎn)錄水平。草甘膦噴施實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所獲得的轉(zhuǎn)基因玉米株系具有很好的草甘膦抗性。本研究獲得了具有較高草甘膦抗性的基于Ds的轉(zhuǎn)mAM79基因玉米，下一步是通過(guò)與含有Ac轉(zhuǎn)座酶的玉米活性系雜交，使mAM79基因表達(dá)框跳躍，以獲得更多的具有不