洋蔥LFY同源基因的克隆與表達分析.pdf

1、洋蔥(Allium cepaL.)為百合科蔥屬二年生草本植物，有普通洋蔥、分蘗洋蔥和頂球洋蔥三個變種。洋蔥風味獨特，且有降血壓、降血脂、抗動脈硬化和預防心肌梗塞的作用，現已被廣泛應用于食品、醫(yī)療和保健領域，市場前景廣闊。洋蔥為綠體春化型植物，如何調控其抽薹開花是長期困擾其生產和育種的問題。LFY基因是植物成花調控網絡中各類基因的匯集點，不僅決定著花的形態(tài)，而且影響著開花時間?？寺FY基因，了解其表達特點，對以基因工程手段調控植物抽薹開

2、花具有重要的意義。
　　 本研究以普通洋蔥‘1007’品系為試材，采用RACE和同源基因克隆方法分離得到普通洋蔥LFY同源基因cDNA序列和基因組DNA序列，使用生物信息學軟件進行序列分析，采用實時熒光定量PCR技術對普通洋蔥LFY同源基因進行時空表達檢測;以分蘗洋蔥‘Z-010’品系為試材，采用同源基因克隆法分離得到分蘗洋蔥LFY同源基因cDNA序列，使用生物信息學軟件進行序列分析，采用半定量RT-PCR技術對分蘗洋蔥LFY同

3、源基因進行時空表達檢測。
　　 試驗結論歸納如下:
　　 (1)通過RACE方法克隆得到普通洋蔥LFY同源基因AcLFY，GenBank登錄號為JX275962。AcLFY基因全長1285 bp，5'非翻譯區(qū)長15 bp，3'非翻譯區(qū)長151 bp，ORF序列全長1119 bp，編碼372個氨基酸序列。AcLFY蛋白含有5'-N端脯氨酸富集區(qū)、亮氨酸拉鏈和酸性區(qū)等轉錄因子特有的結構特征。
　　 (2)采用同源基因

4、克隆法得到AcLFY基因組序列，序列分析結果表明，AcLFY基因組序列長1263 bp，序列中包含2個內含子，大小分別為63 bp和81 bp，Intron1位于基因組序列的第387～450個堿基之間，Intron2位于基因組序列的第960～1042個堿基之間。
　　 (3) qPCR檢測結果表明，AcLFY基因在洋蔥抽薹初期的花序分生組織中表達量達到最大，在花托、花柄以及成形和未成形的花器官中只有微量表達，開花期的葉片中也檢測

5、到AcLFY的大量表達，說明花器官完全形成后，AcLFY mRNA主要存在于葉片中。隨著花器官的發(fā)生至發(fā)育完成，葉片中AcLFY的表達呈增多的趨勢。
　　 (4)同源基因克隆法分離得到分蘗洋蔥LFY同源基因AcADLFY, GenBank登錄號為JX275963。AcADLFY基因cDNA序列全長1119 bp，編碼372個氨基酸序列，含有5'-N端脯氨酸富集區(qū)、酸性區(qū)和亮氨酸拉鏈結構，與普通洋蔥AcLFY基因結構域極為相似，二