水稻OsPP6C基因過表達及干擾的研究.pdf

1、隨著生產水平的日益提高,水稻不僅被作為重要的糧食作物,還被作為經濟作物和飼料作物,具有巨大的開發(fā)利用價值,因此,它對我們的生活和生產越來越重要。盡管近幾年水稻的產量和品質都有所提高,但是仍然受到許多不利條件的影響。當前,進一步培育新的水稻品種才是我國農業(yè)科技發(fā)展的重要工作,利用分子生物學技術和植物基因工程方法,成為解決此項工作的新的有效手段。
　　在細胞中,有限的蛋白磷酸酶和很多蛋白激酶共同維持著蛋白磷酸化的穩(wěn)態(tài)。蛋白絲氨酸/蘇氨

2、酸磷酸酶(簡稱PSPs)可分為磷蛋白磷酸酶(簡稱PPPs)、金屬依賴的蛋白磷酸酶(簡稱PPMs,其中PP2C是PPM的一種)和基于天冬氨酸的磷酸酶[例如FCP(RNA聚合酶II CTD磷酸酶的TFIIF關聯(lián)組分)和SCP(小的CTD磷酸酶)]三個家族。而PPP又包括一型(PP1)、二型(PP2A、PP2B)、新型(PP4、PP5、PP6、PP7)磷酸酶。
　　RNA干擾是通過雙鏈 RNA的介導,特異性地降解相應序列的 mRNA,從

3、而阻斷相應基因表達的轉錄后水平的基因沉默機制。大部分RNA干擾重組載體的組成是由一個被空白序列所隔斷的反向重復序列組成。另外,這個空白序列要求是一個穩(wěn)定的復制子,能夠在大腸桿菌 RNAi質粒中穩(wěn)定遺傳,它可以是β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因、綠色熒光蛋白(GFP)基因和許多內含子中的一種。然而,許多研究表明空白序列是內含子對基因的沉默的效率遠遠大于GUS基因和GFP基因。
　　蛋白磷酸酶6(protein phosphatase6

4、, PP6)在模式植物擬南芥(Arabidopsis thaliana)中已經被證實參與了生長素和脫落酸信號轉導,并且還在擬南芥衰老進程扮演了重要角色,但在其他植物中則鮮有報道。為研究和分析水稻蛋白磷酸酶6(Oryza sativa protein phosphatase6,簡稱PP6)的功能,本文采用RT-PCR技術從水稻中花11葉片cDNA中擴增OsPP6C基因全長,構建了水稻蛋白磷酸酶6催化亞基(Oryza sativa prot

5、ein phosphatase6 catalytic subunit,OsPP6C)基因的過表達載體并構建與GUS融合的pBI121-OsPP6C-GUS過表達載體,同時,構建了OsPP6CRNAi表達載體。結果克隆了水稻蛋白磷酸酶6催化亞基基因OsPP6CRNAi片段和基因全長片段,并將OsPP6C基因連接在植物PBI121載體上和被一段內含子所隔斷的反向重復序列連接到pCambia2300載體上,成功構建了蛋白磷酸酶6催化亞基基因的