Aj--fglA基因在仿刺參再生過(guò)程中的表達(dá)分析.pdf

1、分類號(hào)：密級(jí)：學(xué)校代碼：】Q165學(xué)號(hào)：2QUU193遣宇師箍大擎碩士學(xué)位論文AjfglA基因在仿刺參再生過(guò)程中的表達(dá)分析作者姓名：學(xué)科、專業(yè)：研究方向：導(dǎo)師姓名：吳陽(yáng)天lJ口細(xì)胞生物學(xué)海洋動(dòng)物細(xì)胞生物學(xué)侯林教授2014年03月遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要纖維蛋白原樣蛋白A屬于纖維蛋白原超家族的成員，存在于脊椎動(dòng)物和無(wú)脊椎的不同組織中。它在動(dòng)物的先天免疫，傷VI愈合，凝血反應(yīng)和組織、器官再生等許多生理生化過(guò)程中起著重要的作用。我采用基因

2、克隆(RACE)技術(shù)首次獲得了仿刺參纖維蛋白原樣蛋白A(AjfglA夕的全長(zhǎng)cDNA序列，通過(guò)生物信息學(xué)對(duì)AjfglA進(jìn)行了分析；采用原位雜交技術(shù)(ISH)分析了纖維蛋白原樣蛋白A基因在仿刺參四種不同組織中的表達(dá)部位；為了研究纖維蛋白原樣蛋白A基因在仿刺參體壁、腸和呼吸樹(shù)三個(gè)組織中不同再生階段的表達(dá)量，我們采用了熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)(Realtime—PCR)。基因克隆結(jié)果顯示：纖維蛋白原樣蛋白A基因cDNA全長(zhǎng)為1524bp，開(kāi)放閱

3、讀框?yàn)?49bp，編碼282個(gè)氨基酸殘基。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示FGLA的N末端帶有一個(gè)信號(hào)肽，C末端帶有一個(gè)FBG結(jié)構(gòu)域，62bp的5’端非編碼區(qū)，613bp的3’端非編碼區(qū)。此蛋白分子量為3196kD，理論等電點(diǎn)為564。根據(jù)此蛋白的特點(diǎn)，纖維蛋白原樣蛋白A屬于纖維蛋白原相關(guān)蛋白超家族。原位雜交結(jié)果顯示，纖維蛋白原樣蛋白A基因在仿刺參的體壁、腸、縱肌和呼吸樹(shù)四個(gè)部位均有分布。實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在體壁再生的第一組中，纖維蛋

4、白原樣蛋白A基因呈現(xiàn)出明顯的上調(diào)趨勢(shì)，在10min和40min時(shí)出新峰值，接著表達(dá)量下調(diào)，在體壁再生的第二組中，隨著組織的再生，纖維蛋白原樣蛋白A基因表達(dá)量繼續(xù)上調(diào)，在5d達(dá)到最大值，最后恢復(fù)到正常水平。在腸和呼吸樹(shù)中，纖維蛋白原樣蛋白A基因的表達(dá)量隨著組織的再生也呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)，分別在20d和25d達(dá)到最大值。整理以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，在這三個(gè)組織的每一個(gè)再生階段中纖維蛋白原樣蛋白A基因的表達(dá)量均高于正常組織的水平，而只有當(dāng)新組織再生