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1、分類(lèi)號(hào):密級(jí):學(xué)校代碼:】Q165學(xué)號(hào):2QUU193遣宇師箍大擎碩士學(xué)位論文AjfglA基因在仿刺參再生過(guò)程中的表達(dá)分析作者姓名:學(xué)科、專業(yè):研究方向:導(dǎo)師姓名:吳陽(yáng)天lJ口細(xì)胞生物學(xué)海洋動(dòng)物細(xì)胞生物學(xué)侯林教授2014年03月遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要纖維蛋白原樣蛋白A屬于纖維蛋白原超家族的成員,存在于脊椎動(dòng)物和無(wú)脊椎的不同組織中。它在動(dòng)物的先天免疫,傷VI愈合,凝血反應(yīng)和組織、器官再生等許多生理生化過(guò)程中起著重要的作用。我采用基因
2、克隆(RACE)技術(shù)首次獲得了仿刺參纖維蛋白原樣蛋白A(AjfglA夕的全長(zhǎng)cDNA序列,通過(guò)生物信息學(xué)對(duì)AjfglA進(jìn)行了分析;采用原位雜交技術(shù)(ISH)分析了纖維蛋白原樣蛋白A基因在仿刺參四種不同組織中的表達(dá)部位;為了研究纖維蛋白原樣蛋白A基因在仿刺參體壁、腸和呼吸樹(shù)三個(gè)組織中不同再生階段的表達(dá)量,我們采用了熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)(Realtime—PCR)?;蚩寺〗Y(jié)果顯示:纖維蛋白原樣蛋白A基因cDNA全長(zhǎng)為1524bp,開(kāi)放閱
3、讀框?yàn)?49bp,編碼282個(gè)氨基酸殘基。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示FGLA的N末端帶有一個(gè)信號(hào)肽,C末端帶有一個(gè)FBG結(jié)構(gòu)域,62bp的5’端非編碼區(qū),613bp的3’端非編碼區(qū)。此蛋白分子量為3196kD,理論等電點(diǎn)為564。根據(jù)此蛋白的特點(diǎn),纖維蛋白原樣蛋白A屬于纖維蛋白原相關(guān)蛋白超家族。原位雜交結(jié)果顯示,纖維蛋白原樣蛋白A基因在仿刺參的體壁、腸、縱肌和呼吸樹(shù)四個(gè)部位均有分布。實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在體壁再生的第一組中,纖維蛋
4、白原樣蛋白A基因呈現(xiàn)出明顯的上調(diào)趨勢(shì),在10min和40min時(shí)出新峰值,接著表達(dá)量下調(diào),在體壁再生的第二組中,隨著組織的再生,纖維蛋白原樣蛋白A基因表達(dá)量繼續(xù)上調(diào),在5d達(dá)到最大值,最后恢復(fù)到正常水平。在腸和呼吸樹(shù)中,纖維蛋白原樣蛋白A基因的表達(dá)量隨著組織的再生也呈現(xiàn)出上升趨勢(shì),分別在20d和25d達(dá)到最大值。整理以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn),在這三個(gè)組織的每一個(gè)再生階段中纖維蛋白原樣蛋白A基因的表達(dá)量均高于正常組織的水平,而只有當(dāng)新組織再生
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