豬源與人源MRSA流行病學(xué)調(diào)查及對氟喹諾酮類藥物耐藥機制研究.pdf

1、金黃色葡萄球菌是人類重要的病原菌之一，其造成的感染能導(dǎo)致多種疾病，可以引起人的局部化膿性感染、肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，也可以導(dǎo)致敗血癥、菌血癥、膿毒癥等全身性感染，嚴(yán)重時甚至威脅人類生命。甲氧西林應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床治療金黃色葡萄球菌感染不久后，便出現(xiàn)了耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)。隨著近些年來抗菌藥物在臨床的大量使用，MRSA耐藥性日益嚴(yán)重

2、，治療難度不斷加大，病死率也愈來愈高，如今已經(jīng)成為全球性公共衛(wèi)生問題。
　　 近年來，我國畜牧業(yè)集約化和規(guī)?；B(yǎng)殖程度逐漸提高，隨著養(yǎng)殖場抗菌藥物的大量使用，除了醫(yī)院相關(guān)性(hospital-associated，HA-MRSA)和社區(qū)相關(guān)性感染（community-associated，CA-MRSA）之外，MRSA的流行病學(xué)也發(fā)生很大的變化，出現(xiàn)了另一類導(dǎo)致人類嚴(yán)重感染的牲畜相關(guān)性MRSA(Livestock-associa

3、ted MRSA,LA-MRSA)，并已有多篇文獻報道LA-MRSA能夠在豬和人之間傳播，給人類健康和MRSA疾病的治療帶來更不利影響。
　　 本研究于2011年8月-2012年6月分別從浙江省，江蘇省，上海市中6個地區(qū)8個規(guī)?；i場及1個屠宰場采集豬鼻腔拭子樣品共計348份，在上海市某醫(yī)院收集不同住院病人的痰和咽拭子等樣品120份，所有樣品分別通過75 g/L氯化鈉肉湯預(yù)增菌、顯色培養(yǎng)基顯色培養(yǎng)、雙重PCR（nuc和mecA基

4、因）方法和耐藥表型分離鑒定金黃色葡萄球菌及MRSA。共計分離到174株豬源金黃色葡萄球菌，其中89株為豬源MRSA，檢出率為25.6％(89/348);醫(yī)院分離到52株人源金黃色葡萄球菌，其中15株為人源MRSA，檢出率為12.5％(15/120)。以微量肉湯稀釋法進行藥物敏感性試驗。檢測了89株豬源MRSA菌株對9類13種常用抗菌藥物的敏感性，15株人源MRSA對8類10種常用抗菌藥物的敏感性。豬源與人源MRSA除對利奈唑胺，萬古霉素

5、全部敏感外，對其他抗菌藥物都表現(xiàn)出不同程度的耐藥。值得注意的，本研究中分離的全部豬源MRSA都對截短側(cè)耳類藥物泰妙菌素、沃尼妙林以及人醫(yī)新藥瑞他帕林表現(xiàn)高水平耐藥。這也提示我們要防控動物源耐藥菌或耐藥基因通過食物鏈或者環(huán)境向人類傳播的潛在風(fēng)險。
　　 采用金黃色葡萄球菌盒式染色體(SCC) mec、多位點序列(MSLT)和葡萄球菌蛋白A(spa)方法對豬源和人源MRSA進行分型。分型結(jié)果顯示豬源MRSA全部為ST9-SCCmec

6、Ⅳb型，其中80株為spa t899型，9株為spa t2922型。人源MRSA中14株為ST5-SCCmecⅡ-t002型，1株為ST88型，并且其spa分型為新型，已被命名為t10775型，這株SCCmec未能分型。綜上結(jié)果本研究發(fā)現(xiàn)上海及周邊地區(qū)豬源MRSA主要流行ST9-t899-SCCmecⅣb型，而人源MRSA主要流行ST5-t002-SCCmecⅡ型，豬源和人源MRSA之間暫未發(fā)現(xiàn)有相互傳播的跡象。
　　 此外，本

7、研究還從分離的菌株中選擇部分豬源和人源MRSA，調(diào)查其靶基因突變對氟喹諾酮類藥物耐藥性的影響。調(diào)查結(jié)果顯示在grlA，gyrA兩個靶基因中，人源MRSA大部分為雙點位突變，表現(xiàn)為MRSA對5種氟喹諾酮類藥物的耐藥值很高;豬源MRSA基本都為一個點突變，表現(xiàn)為MRSA對5種喹諾酮類藥物的耐藥值都很低。而grlB和gyrB兩個靶基因突變較低，在grlB中只有一株菌突變，且為雙點位突變（Glu561His，Gly571Val），在gyrB中也