體外誘導(dǎo)肺炎支原體對(duì)喹諾酮類藥物耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、肺炎支原體(Mp)是人類呼吸道感染的常見病原體,近年來肺炎支原體感染有逐漸增多的趨勢(shì),在社區(qū)獲得性肺炎中占據(jù)重要地位。大環(huán)內(nèi)酯類抗生素是治療肺炎支原體感染的首選藥物,但近年研究發(fā)現(xiàn)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對(duì)肺炎支原體的耐藥率較高。喹諾酮類抗生素是治療肺炎支原體感染的常用藥物,尤其是新一代喹諾酮類抗生素增強(qiáng)了對(duì)肺炎支原體的抗菌活性。喹諾酮類藥物的作用機(jī)制是干擾細(xì)胞的DNA復(fù)制,其作用的靶位是DNA促旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ。目前未發(fā)現(xiàn)對(duì)喹諾酮類藥物耐藥

2、的肺炎支原體。但在人類支原體中,臨床上已經(jīng)分離出對(duì)喹諾酮類藥物耐藥的人型支原體和解脲支原體。通過擴(kuò)增喹諾酮耐藥決定區(qū)的gyrA、gyrB、parC和parE基因,已證實(shí)人型支原體和解脲支原體的耐藥與gyrA和parC基因的點(diǎn)突變有關(guān)。本研究以藥物選擇性-基因突變-耐藥形成理論為出發(fā)點(diǎn),采用人工誘導(dǎo)的方式,用喹諾酮類抗生素環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星對(duì)肺炎支原體標(biāo)準(zhǔn)株FH進(jìn)行體外誘導(dǎo),使之逐步產(chǎn)生耐藥性,通過測(cè)定誘導(dǎo)后耐藥株對(duì)環(huán)丙沙星、

3、左氧氟沙星、加替沙星的最低抑菌濃度(MIC),檢測(cè)耐藥程度的變化。并擴(kuò)增耐藥株的喹諾酮耐藥決定區(qū)的gyrA、gyrB、parC和parE基因,明確耐藥性的產(chǎn)生與喹諾酮耐藥決定區(qū)基因突變的關(guān)系,為肺炎支原體感染的防治提供理論依據(jù)和對(duì)策。
　　 目的：探討在亞抑菌濃度喹諾酮類藥物多代培養(yǎng)后,肺炎支原體標(biāo)準(zhǔn)株FH對(duì)喹諾酮類藥物敏感性的變化及其機(jī)制。
　　 方法將肺炎支原體標(biāo)準(zhǔn)株FH在含有亞抑菌濃度環(huán)丙沙星、左氧氟沙星和加替沙星

4、的液體培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)后,.測(cè)誘導(dǎo)后菌株的最低抑菌濃度。提取標(biāo)準(zhǔn)株及誘導(dǎo)耐藥株的DNA,應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增喹諾酮耐藥決定區(qū)(QRDR)的gyrA、gyrB、parC和parE基因。測(cè)序分析耐藥株的基因突變情況。
　　 結(jié)果：經(jīng)亞抑菌濃度喹諾酮類藥物多代培養(yǎng)誘導(dǎo)后,肺炎支原體標(biāo)準(zhǔn)珠FH出現(xiàn)對(duì)誘導(dǎo)藥物的耐藥及交叉耐藥。6株藥物誘導(dǎo)耐藥株中,在左氧氟沙星誘導(dǎo)的耐藥株中g(shù)yrA基因編碼的95位蛋氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)楫惲涟彼?parC基因編碼的8