池蝶蚌親環(huán)素蛋白家族(Cyps)分子特征及CypA功能初步研究.pdf

1、本文以優(yōu)質(zhì)淡水育珠蚌-池蝶蚌為研究對(duì)象，采用RACE PCR方法獲得了池蝶蚌親環(huán)素蛋白家族(Cyps)中CypB、CypD和Cyp18.9 cDNA基因全長，包括已提交到NCBI Genbank的CypA（Genbank登錄號(hào):HM027883）共獲得了4個(gè)家族成員。
　　 CypB全長有944個(gè)堿基，在44-676之間是一個(gè)長633bp的開放閱讀框，編碼210個(gè)氨基酸，分子量為22.98kDa，理論等定點(diǎn)PI=9.10。Cyp

2、D基因全長為739個(gè)堿基，其開放閱讀框是140～612，編碼124個(gè)氨基酸，分子量大小為14.2kDa，理論等電點(diǎn)PI=5.65。Cyp18.9基因全長是1184個(gè)堿基，開放閱讀框位于233～742之間，僅僅編碼169個(gè)氨基酸，分子量為18.9kDa，理論等電點(diǎn)PI=5.49。生物學(xué)信息法分析表明CypB蛋白有一段19～22個(gè)堿基組成的很強(qiáng)的加尾信號(hào)，高級(jí)結(jié)構(gòu)由8條反向平行的折疊片形成一個(gè)右手桶狀結(jié)構(gòu)，其頂端和底部是一些復(fù)雜莖環(huán)(loo

3、p)結(jié)構(gòu)和與β折疊片段兩端相連的3條α-螺旋相連接，其中CypA、CypB、CypD高級(jí)結(jié)構(gòu)類似，但Cyp18.9略有差異。系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果表明池蝶蚌與新荷蘭芋螺（Conus novaehollandiae）進(jìn)化關(guān)系最近。
　　 CypA是從池蝶蚌血細(xì)胞cDNA文庫里首次篩選克隆到的第一個(gè)Cyp家族成員?；谖覀兦捌谘芯恳褭z測了CypA在池蝶蚌中的組織表達(dá)特征以及病原菌脅迫下的CypA免疫應(yīng)激情況，并已獲得了CypA多克隆抗血清（

4、暫未發(fā)表）。本研究進(jìn)一步檢測了多克隆抗體對(duì)池蝶蚌CypA蛋白的結(jié)合特異性，分別用制備的多抗對(duì)重組純化CypA蛋白、提取的池蝶蚌肝臟和性腺組織總蛋白進(jìn)行了westernblot檢測，檢測結(jié)果顯示，在37kDa和18kDa處分別出現(xiàn)了非常明顯的條帶。并將原核表達(dá)的重組CypA蛋白稀釋到相應(yīng)(0、50、100、200、400、800ng/ml)濃度，刺激Hela細(xì)胞系后發(fā)現(xiàn)，重組池蝶蚌CypA蛋白一定程度上能促進(jìn)Hela細(xì)胞的生長，且在100