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文檔簡介
1、本文以優(yōu)質淡水育珠蚌-池蝶蚌為研究對象,采用RACE PCR方法獲得了池蝶蚌親環(huán)素蛋白家族(Cyps)中CypB、CypD和Cyp18.9 cDNA基因全長,包括已提交到NCBI Genbank的CypA(Genbank登錄號:HM027883)共獲得了4個家族成員。
CypB全長有944個堿基,在44-676之間是一個長633bp的開放閱讀框,編碼210個氨基酸,分子量為22.98kDa,理論等定點PI=9.10。Cyp
2、D基因全長為739個堿基,其開放閱讀框是140~612,編碼124個氨基酸,分子量大小為14.2kDa,理論等電點PI=5.65。Cyp18.9基因全長是1184個堿基,開放閱讀框位于233~742之間,僅僅編碼169個氨基酸,分子量為18.9kDa,理論等電點PI=5.49。生物學信息法分析表明CypB蛋白有一段19~22個堿基組成的很強的加尾信號,高級結構由8條反向平行的折疊片形成一個右手桶狀結構,其頂端和底部是一些復雜莖環(huán)(loo
3、p)結構和與β折疊片段兩端相連的3條α-螺旋相連接,其中CypA、CypB、CypD高級結構類似,但Cyp18.9略有差異。系統(tǒng)進化樹結果表明池蝶蚌與新荷蘭芋螺(Conus novaehollandiae)進化關系最近。
CypA是從池蝶蚌血細胞cDNA文庫里首次篩選克隆到的第一個Cyp家族成員?;谖覀兦捌谘芯恳褭z測了CypA在池蝶蚌中的組織表達特征以及病原菌脅迫下的CypA免疫應激情況,并已獲得了CypA多克隆抗血清(
4、暫未發(fā)表)。本研究進一步檢測了多克隆抗體對池蝶蚌CypA蛋白的結合特異性,分別用制備的多抗對重組純化CypA蛋白、提取的池蝶蚌肝臟和性腺組織總蛋白進行了westernblot檢測,檢測結果顯示,在37kDa和18kDa處分別出現(xiàn)了非常明顯的條帶。并將原核表達的重組CypA蛋白稀釋到相應(0、50、100、200、400、800ng/ml)濃度,刺激Hela細胞系后發(fā)現(xiàn),重組池蝶蚌CypA蛋白一定程度上能促進Hela細胞的生長,且在100
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