池蝶蚌鐵蛋白基因的特征與表達(dá)分析.pdf

1、池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)原產(chǎn)于日本滋賀縣琵琶湖,屬軟體動(dòng)物門、瓣鰓綱、蚌科、帆蚌屬,是一種優(yōu)質(zhì)的淡水育珠蚌。本研究從池蝶蚌中克隆得到兩個(gè)鐵蛋白亞基基因(HsFer-1和HsFer-2),熒光定量PCR技術(shù)分析了ferritinmRNA組織表達(dá)譜及在細(xì)菌誘導(dǎo)下主要組織中ferritin表達(dá)特征,原核表達(dá)重組蛋白,制備多克隆抗體。
　　 1.從本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的嗜水氣單胞菌誘導(dǎo)的池蝶蚌血細(xì)胞cDNA文庫(kù)中獲得編

2、碼ferritin的兩條EST,運(yùn)用SMARTRACE方法克隆得到HsFer-1和HsFer-2基因的cDNA全長(zhǎng)。序列信息已提交至NCBI,GenBank登錄號(hào)分別為HQ841015和HQ841016。
　　 2.Real-timePCR結(jié)果顯示HsFer-1和HsFer-2mRNA在肝胰腺、性腺、斧足、腸、腎、心臟、鰓、閉殼肌、外套膜和血細(xì)胞中均有表達(dá),在肝胰腺中表達(dá)量最高,其次為性腺、斧足和腸,在血細(xì)胞中表達(dá)量最低。

3、>　　 3.用嗜水氣單胞菌誘導(dǎo)池蝶蚌,Real-timePCR結(jié)果顯示細(xì)菌誘導(dǎo)顯著上調(diào)HsFer-1基因mRNA在肝胰腺、性腺和血細(xì)胞中的表達(dá),其最高表達(dá)水平分別是對(duì)照組的2.47倍、9.59倍和1.37倍。誘導(dǎo)后,HsFer-2基因mRNA表達(dá)量在性腺中升高到4.87倍,而在肝胰腺和血細(xì)胞中分別下降至0.52倍和0.57倍。
　　 4.構(gòu)建pET-32a-HsFer-1和pET-32a-HsFer-2重組表達(dá)質(zhì)粒,原核表達(dá)重