玉米籽粒特異表達(dá)大豆鐵蛋白Ferritin基因遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、鐵是人體生理代謝過(guò)程中不可缺少的必需營(yíng)養(yǎng)元素之一。然而，由于飲食中鐵含量水平低或鐵的生物有效性低等原因，造成人體鐵營(yíng)養(yǎng)素缺乏，嚴(yán)重影響人體的生理和心理機(jī)能。鐵蛋白(Ferritin)是一種廣泛存在于生物體中的可以貯存鐵離子的貯藏蛋白，調(diào)控鐵元素的吸收和釋放。玉米(Zea mays L.)的種植面積在我國(guó)居第一位，是主要的糧食、飼料作物之一，其種子中三倍體胚乳占其籽?？傊亓康?0％-85％，是主要的食用部位。本研究使用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化

2、方法將重組載體pCUB-Zein∷Ferritin導(dǎo)入玉米，期望在玉米胚乳特異表達(dá)基因15kDβ-Zein啟動(dòng)子的調(diào)控下，使大豆鐵蛋白Ferritin基因玉米玉米籽粒中特異表達(dá)，提高籽粒鐵含量，為改良玉米營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)，解決以玉米為主食人群的缺鐵問(wèn)題提供幫助。
　　主要結(jié)果如下:
　　1.分離Zein∷Ferritin片段，基于pCUB植物表達(dá)載體構(gòu)建pCUB-Zein∷ Ferritin，并通過(guò)菌液PCR、質(zhì)粒PCR、酶切及測(cè)序

3、等方法加以驗(yàn)證。
　　2.采用凍融法將植物表達(dá)載體pCUB-Zein∷ Ferritin轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌菌株LBA4404，經(jīng)農(nóng)桿菌菌液PCR檢測(cè)，表明表達(dá)載體已成功導(dǎo)入農(nóng)桿菌LBA4404。
　　3.農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化玉米自交系齊319和鄭58的莖尖，對(duì)除草劑（草銨磷）抗性植株的基因組DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)，轉(zhuǎn)化率分別為3.6％和0。
　　4.從20個(gè)受體材料為齊319的T0代陽(yáng)性株系中選取1000粒種子，僅有672粒種子發(fā)芽