黃病毒解旋酶來源的富含精氨酸肽對日本腦炎病毒抑制作用的研究.pdf

1、日本腦炎病毒(JEV)屬于黃病毒科，是引起人類和動物急性病毒性腦炎的病原之一，以蚊為傳播媒介在人和動物中傳播。人感染JEV后引起不可逆的神經(jīng)系統(tǒng)損害，死亡率在20-50％;豬感染JEV后引起妊娠母豬流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、木乃伊胎、弱仔，公豬睪丸炎，嚴(yán)重危害人類健康以及養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展。JEV基因組編碼3個結(jié)構(gòu)蛋白和7個非結(jié)構(gòu)蛋白，其中非結(jié)構(gòu)蛋白NS3是一個多功能的大分子蛋白，性質(zhì)保守，具有蛋白酶和NTP酶/解旋酶活性，NS3在病毒多蛋白加工和基因組復(fù)

2、制及病毒與宿主細(xì)胞的相互作用過程中扮演十分重要的作用，其完整的酶學(xué)活性對病毒的增殖是必不可少的，是潛在的抗病毒研究靶點。
　　抗病毒肽是一類對病毒有殺傷作用或抑制作用的小分子多肽，在病毒感染早期就能對病毒產(chǎn)生抑制作用，越來越多的研究證明了多肽對許多病毒有抗病毒作用，包括艾滋病病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)、禽流感病毒（AIV）等，因此抗病毒肽具有廣闊的應(yīng)用前景。有研究報道來源于HCV、JEV、WNV解旋酶保守的富含精氨酸肽

3、能夠抑制解旋酶的活性。
　　本試驗合成了來源于CSFV、DENV、JEV、HCV、WNV解旋酶富含精氨酸的5個肽，通過實時熒光定量RT-PCR、流式細(xì)胞術(shù)、噬斑試驗、組織病理學(xué)與免疫組化研究、動物試驗等方法研究這些肽對JEV的抑制作用。
　　我們的結(jié)果證實了這些富含精氨酸肽能夠有效的穿過細(xì)胞膜迅速的定位到細(xì)胞質(zhì)，而且這些肽在細(xì)胞中能至少穩(wěn)定48小時，細(xì)胞毒性試驗的結(jié)果證明這些肽在細(xì)胞中沒有明顯的細(xì)胞毒性。這些肽在體內(nèi)和體外對

4、JEV都有不同程度的抑制作用，其有效濃度EC50在微摩爾范圍之內(nèi)。在100μM濃度時Pjev、Pcsfv和Phcv強(qiáng)烈抑制了病毒RNA水平，減少了JEV囊膜蛋白的表達(dá)，在EC5015μM時抑制了JEV在BHK-21細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制。動物試驗顯示肽能延遲EV攻毒小鼠的死亡時間，減弱臨床癥狀。與其他肽相比，Pjev抑制JEV的效果更好，預(yù)處理Pjev降低了小鼠的死亡率，對小鼠有75％的保護(hù)率，其他肽盡管不能保護(hù)所有的小鼠免受致死劑量的JEV感染