華南地區(qū)桑樹(shù)青枯病原菌的收集鑒定及侵染機(jī)制的初步研究.pdf

1、我國(guó)是世界蠶絲業(yè)的發(fā)源地,蠶桑生產(chǎn)已有五千多年的悠久歷史,華南地區(qū)歷來(lái)都是我國(guó)主要的蠶桑生產(chǎn)基地之一,目前華南蠶區(qū)桑園面積400多萬(wàn)畝,占全國(guó)桑園總面積的1/3。桑樹(shù)青枯病是華南地區(qū)桑園中的一種毀滅性、危害較嚴(yán)重的病害,給桑樹(shù)生產(chǎn)造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失,嚴(yán)重影響著蠶桑生產(chǎn)。前人曾對(duì)桑樹(shù)青枯病的發(fā)病規(guī)律和防治方法等進(jìn)行了一系列研究,取得了一定進(jìn)展,但對(duì)桑樹(shù)青枯病的病原菌和致病機(jī)理了解還比較少,缺乏對(duì)桑樹(shù)青枯病全面而系統(tǒng)的研究。
　　本

2、研究通過(guò)對(duì)華南地區(qū)桑樹(shù)青枯病原菌的收集、分離與分子鑒定、青枯菌的生化型劃分、青枯菌的接種條件及致病力分化以及青枯菌的侵染發(fā)病機(jī)制等方面進(jìn)行了相關(guān)研究,以期深入了解桑樹(shù)青枯病的侵染發(fā)病機(jī)制,為桑樹(shù)抗青枯病育種、防止青枯菌傳播和蔓延提供理論和技術(shù)支撐。本文研究的主要結(jié)果如下:
　　(1)通過(guò)調(diào)查華南地區(qū)的青枯病主要疫區(qū),發(fā)現(xiàn)桑樹(shù)青枯病的癥狀有兩類,主要區(qū)別表現(xiàn)在發(fā)病初期,一種表現(xiàn)為葉片青枯,另一種表現(xiàn)為葉片褐枯,一般從頂芽下第3-4片

3、葉片最先出現(xiàn)萎蔫癥狀,后表現(xiàn)為青枯或褐枯,桑根木質(zhì)部出現(xiàn)黃褐色條紋。兩類癥狀在發(fā)病后期表現(xiàn)癥狀基本類似:桑樹(shù)整株葉片全部枯萎且逐步腐爛掉落,根部表皮開(kāi)始腐爛,木質(zhì)部整體變成黑褐色
　　(2)對(duì)華南地區(qū)收集到的117個(gè)桑青枯病的桑株的樣本進(jìn)行病原菌的分離,共分離到370株病原菌。利用16SrDNA-PCR測(cè)序鑒定,共得到223株屬于青枯菌,44株屬于假單胞菌,72株屬于腸桿菌,其他雜菌31株。結(jié)果表明華南地區(qū)桑樹(shù)青枯病主要是由勞爾氏

4、青枯菌引起的。
　　(3)3類菌種在TTC培養(yǎng)基的菌體形態(tài)基本相似,多為圓形,平滑有光澤,濕潤(rùn)而呈粘液狀,革蘭氏染色呈陰性。在掃描電鏡下,青枯菌和假單胞菌均呈短桿狀,青枯菌大小約為1.1×0.4μm,假單胞菌大小約為1.69×0.4μm。3類菌種的差異主要表現(xiàn)在生長(zhǎng)速度和菌落顏色上:青枯菌最佳培養(yǎng)時(shí)間為48h,而腸桿菌和假單胞菌最佳培養(yǎng)時(shí)間為24h;青枯菌和假單胞菌的菌落為暗紅色,同時(shí)青枯菌在生長(zhǎng)后期表面會(huì)出現(xiàn)一層白色暈圈,而腸桿

5、菌的菌落一般為粉色。
　　(4)對(duì)其中的110株青枯菌進(jìn)行生化型的劃分,其中有89株青枯菌是生化I型,生化Ⅲ型4株,生化Ⅴ型7株。表明華南地區(qū)桑樹(shù)青枯菌主要是生化I型。
　　(5)通過(guò)正交試驗(yàn)對(duì)桑苗侵染條件進(jìn)行摸索,結(jié)果表明水培傷根接種法最佳發(fā)病條件為:苗齡30d,溫度30℃,接菌濃度109cfu/mL。利用水培傷根侵染法對(duì)30株青枯菌進(jìn)行致病力的鑒定,發(fā)現(xiàn)不同菌株間致病力差異較大,其中12-50-1號(hào)、11-41號(hào)和11-