豬骨骼肌型α肌動(dòng)蛋白及蘋果酸酶1基因啟動(dòng)子的功能分析.pdf

1、豬是與人類關(guān)系最為密切的家畜之一，與人們的日常生活息息相關(guān)。豬肉是世界上消耗量最大的肉類，豬肉產(chǎn)量及品質(zhì)的提高與人們生活水平的改善密切相關(guān)。
　　 利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)使啟動(dòng)子啟動(dòng)外源基因在骨骼肌中特異性的表達(dá)是提高肉質(zhì)的一個(gè)重要方法。豬骨骼肌α肌動(dòng)蛋白(α-actin)是構(gòu)成骨骼肌肌纖維細(xì)絲的主要成分，其啟動(dòng)子能使外源基因在骨骼肌中特異性表達(dá)。本研究分別用PCR、限制性內(nèi)切酶酶切和定點(diǎn)突變方法構(gòu)建不同表達(dá)載體，通過細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染技術(shù)

2、，利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)不同載體的表達(dá)情況。結(jié)果表明：
　　 1.2.0Kb-2.3Kb和0.06Kb-0.37Kb是調(diào)控豬骨骼肌型α肌動(dòng)蛋白基因表達(dá)水平的重要區(qū)段。
　　 2.在0.06Kb-0.37Kb有一個(gè)CArGbox位點(diǎn)影響該基因的轉(zhuǎn)錄，刪除和突變?cè)撈魏?，其啟?dòng)活性分別是3.04Kb片段的20％和43%，顯著降低(P<0.01)。
　　 研究結(jié)果可為構(gòu)建豬骨骼肌特異性高效表達(dá)的載體，以指導(dǎo)外源基因

3、在豬肉中特異性的表達(dá)提供參考。
　　 脂肪的沉積能力與豬肉品質(zhì)有著密切的聯(lián)系。蘋果酸酶1(malicenzyme1，簡(jiǎn)稱ME1)是機(jī)體內(nèi)源性脂肪酸合成的關(guān)鍵酶，與生物體的脂肪酸合成效率密切相關(guān)。豬的脂肪沉積能力與ME1的表達(dá)水平有關(guān)。為了研究該基因在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)調(diào)控，本研究分別用PCR和定點(diǎn)突變等方法，克隆了豬ME1基因的5’調(diào)控區(qū)，研究了其多態(tài)性與報(bào)告基因表達(dá)量的關(guān)系，通過構(gòu)建不同刪除載體分析了該基因5’調(diào)控區(qū)的功能。結(jié)果

4、表明：
　　 1.在豬ME1基因5’調(diào)控區(qū)-1068位點(diǎn)的G到A的突變產(chǎn)生的等位基因G有增加報(bào)告基因表達(dá)的趨勢(shì)，但差異不顯著。
　　 2.刪除試驗(yàn)結(jié)果顯示，該基因的5’調(diào)控區(qū)614bp-717bp有增強(qiáng)豬MEI基因表達(dá)的順式元件，263bp-405bp區(qū)段有抑制豬MEI基因表達(dá)的順式元件。
　　 綜上所述，本研究對(duì)豬骨骼肌發(fā)育及脂肪沉積有密切關(guān)系的兩個(gè)基因α-actin和ME1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控進(jìn)行了分析，分別找到了調(diào)控