蘋果屬觀賞海棠McMYB16、McMYB12的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、花色苷是廣泛存在于自然界中的類黃酮物質(zhì)，是一類從紅到藍(lán)到紫的植物色素，其對植物中花色、葉色、果色的形成具有重要的地位，目前對于花色苷的代謝途徑研究較為深入，植物花色苷的生物合成主要受兩類基因調(diào)控，一類是結(jié)構(gòu)基因，直接編碼花色苷合成途徑中的酶，在不同植物中所共有，另一類是調(diào)節(jié)基因，調(diào)節(jié)基因是調(diào)控結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)活性和表達(dá)程度的基因，正是調(diào)節(jié)基因調(diào)控著結(jié)構(gòu)基因的時(shí)空表達(dá)，從而決定著花色苷合成的時(shí)間和分布，而其中MYB蛋白是植物花色苷合成途徑中

2、涉及最為廣泛的調(diào)節(jié)因子，因此MYB轉(zhuǎn)錄因子的克隆對探究花色苷合成途徑進(jìn)而研究植物色澤形成機(jī)理具有重要作用。
　　 以蘋果屬觀賞海棠品種‘王族’葉片總RNA為模板，通過RT-PCR與RACE擴(kuò)增，克隆獲得1條1350bp的MYB基因cDNA全長序列，其基因編碼區(qū)共768bp，編碼255個(gè)氨基酸，命名為McMYB16。氨基酸序列多重比對和系統(tǒng)進(jìn)化樹對McMYB16蛋白分析；實(shí)時(shí)熒光定量PCR和高效液相色譜法對觀賞海棠不同品種不同時(shí)期

3、的McMYB16、McC4H表達(dá)量、花色苷含量進(jìn)行測定分析。結(jié)果表明：McMYB16與MdMYB16和AtMYB4同源性較高，并與MdMYB16處于同于分支，與AtMYB4親緣關(guān)系較近。它與McC4H表達(dá)量、花色苷含量成負(fù)相關(guān)性。推測該基因?yàn)楸奖楹铣赏緩街械霓D(zhuǎn)錄抑制子，通過調(diào)控公共苯丙烷途徑的重要關(guān)鍵酶基因McC4H的表達(dá)開啟與關(guān)閉從而起到對下游途徑的抑制作用。
　　 以蘋果屬觀賞海棠品種‘王族’葉片總RNA為模板，通過RT-

4、PCR與RACE擴(kuò)增，克隆獲得1條1632bp的MYB基因cDNA全長序列，其基因編碼區(qū)共1047bp，編碼348個(gè)氨基酸，命名為McMYB12。氨基酸序列多重比對和系統(tǒng)進(jìn)化樹對McMYB12蛋白進(jìn)行分析，結(jié)果表明：McMYB12與AtMYB12親緣關(guān)系較近。且其蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)與AtMYB12也較為相似，其在選用的觀賞海棠品種中的各個(gè)時(shí)期均有表達(dá)，且在新葉有色類品種‘絢麗’、綠色葉品種‘火焰’中的相對表達(dá)量與花色苷含量成負(fù)相關(guān)趨勢，推測