蘋果屬海棠葉片色素分析及體外酶促反應(yīng)體系建立.pdf

1、為了解決多種病害對蘋果屬海棠的危害，提高其觀賞性和果品質(zhì)量。以32種海棠葉片作為試驗(yàn)材料。使用紫外可見分光亮度計，以福林-肖卡法、三氯化鋁法分別測其總多酚、總黃酮含量;使用高效液相色譜，分析兒茶素類含量，使用SPSS軟件分析總多酚、總黃酮及兒茶素類含量，篩選出具有較好體外酶促反應(yīng)的海棠品種，再對酶促反應(yīng)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化，為后期蛋白質(zhì)分子量分級，縮小兒茶素差向異構(gòu)酶范圍提供實(shí)驗(yàn)材料，為找出抗病害的目的基因打下基礎(chǔ)。
　　參試的32種

2、海棠葉片中，總多酚含量為10.34～114.31 mg GAE eq./g DW，總黃酮含量為421.39～103.45 mg Rutin eq./100 g DW;兒茶素含量為4.21～245.73 mg/kg DW，表兒茶素含量為11.43～320.78 mg/kg DW。在32種海棠葉片中，同時含有兒茶素與表兒茶素在150 mg/kg DW的品種分別有西府海棠、湖北海棠、三葉海棠、‘紅麗’海棠、‘雪球’海棠、‘櫻葉’海棠，其中三葉

3、海棠含有的兒茶素（210.53±3.28 mg/kg DW）與表兒茶素（320.78±7.96 mg/kg DW）含量最高;其中綠色葉片的海棠含有兒茶素與表兒茶素的含量相對較高，彩色葉片的海棠品種含有兒茶素與表兒茶素含量相對較低。依據(jù)海棠葉片同時含有兒茶素與表兒茶素，及其兩者之間相對總量及含量的倍數(shù)關(guān)系，選取三葉海棠、‘雪球’海棠、湖北海棠進(jìn)行體外酶促反應(yīng)試驗(yàn)，篩選出已知品種中具有較好酶促反應(yīng)的海棠品種。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:提取的

4、海棠葉片中酶液具有活性;通過高效液相色譜儀檢測，在波長280 nm下，分別在26.3min處檢測出catechin，在29.6min處檢測出epicatechin。在酶促反應(yīng)中，雪球海棠、三葉海棠、湖北海棠兒茶素分別消耗了204.21、269.11、289.04mg/kg DW，消耗率分別為88.34％、89.97％、92.25％，表兒茶素分別增加了173.75、251.83、279.60mg/kg DW，在酶促反應(yīng)中最佳提取液pH值分

5、別為7.0、7.5、7.5，緩沖液pH值分別為8.5、8.0、8.0。
　　通過比較三種海棠葉片兒茶素消耗量及表兒茶素生成量，后期優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件選擇湖北海棠;通過對湖北海棠體外酶促反應(yīng)最適條件實(shí)驗(yàn)表明:在1ml反應(yīng)體系下，酶量500μL;緩沖液350μL;底物50μL4μg/mL的catechin;溫度30℃，時間為45min，50μL的35％TCA終止反應(yīng)，catechin消耗了327.68 mg/ kg DW， epicatec