觀賞蘋果引種與蘋果屬(malusmiall.)植物dna指紋分析

1、山東農(nóng)業(yè)大學博士學位論文觀賞蘋果引種與蘋果屬（Malus Miall.）植物DNA指紋分析姓名：郭翎申請學位級別：博士專業(yè)：果樹學指導教師：束懷瑞;沈向20090612觀賞蘋果引種與蘋果屬( M a l u s M i l l ．) 植物D N A 指紋分析種。為在我國北方進一步引、育及推廣觀賞蘋果品種，為在此基礎上培育我國具有自主知識產(chǎn)權(quán)的新觀賞蘋果品種提供了翔實的資料及科學基礎。3 ．用A F L P ( A m p l i f i

2、 e d F r a g m e n t L e n g t hP o l y m o r p h i s m ) 技術(shù)，對7 2 個蘋果屬植物樣本( 3 4 個種、變種、雜交種及3 8 個品種) 進行遺傳多樣性分析。在6 4 對A F L P 引物中選出6 對引物進行擴增，得到有效譜帶1 ，6 9 2 條，其中多態(tài)譜帶占1 ，5 4 7 條，多態(tài)譜帶比率為9 1 ．4 ％。對7 2 個樣品的試實驗數(shù)據(jù)進行聚類分析，它們的相似系數(shù)為從O

3、 ．5 4 到～0 ．8 2 。研究發(fā)現(xiàn)：相似系數(shù)為O ．6 0 處時參試材料被分為4 大類，佛羅倫薩蘋果( M a l u s f l o r e n t i n a ) 為一類；綠蘋果組( S e c t ．C h o r o m e l e s ) 和多勝蘋果組( S e c t ．D o c y n i o p s i s ) 分別各聚一類；花楸組( S e c t ．S o r b o m a l u s ) 、脫萼組( S

4、e c t ．G y m n o m e l e s )和蘋果組( S e c t ．M a l u s ) 試材聚為一類，所有蘋果品種和觀賞蘋果品種全聚在原產(chǎn)亞洲的花楸組、脫萼組及蘋果組中。亞洲原產(chǎn)的蘋果屬植物對于蘋果及觀賞蘋果品種的發(fā)展有著重要作用。根據(jù)A F L P 試實驗結(jié)果，及文獻資料，支持建議將佛羅倫薩蘋果組( S e c t ．F l o r e n t i n a e C h e n gM ．H ．) 成立單種組：建議將

5、原屬花楸組植物除佛羅倫薩蘋果外，全部并入蘋果組：取消脫萼組，將其組內(nèi)的植物全部并入蘋果組。4 ．T R A P 是一種新的基于P C R 的植物基因型標記技術(shù)，該技術(shù)采用兩個1 8 核苷酸引物產(chǎn)生標記，一個為固定引物，依據(jù)E S T 序列設計；另一個為隨機引物，針對外顯子和內(nèi)含子的特點，設計為分別富含G C 或A T 核心區(qū)的任意序列。本論文用T R A P( T a r g e t r e g i o n a m p l i f i

6、c a t i o np o l y m o r p h i s m ) 技術(shù)對蘋果屬4 2 種、變種、雜交種及品種進行分析。兩個固定引物是用三葉海棠( M a l u ss i e b o l d i i ) 的m a t K 基因片段設計而來，固定引物為A F 3 0 9 1 8 1 L ( 5 ’G A T T T G C A G T C A l 盯G T G G - 3 ) 和A F 3 0 9 1 8 1 R( 5 '

7、 A A A T G T G G G A A T T T G T C C ．3 ) ， 隨 機 引 物 為 S a l 2 ．7 0 0( r r C l ’A G G T A A T C C A A C A A C A ) 和G a 5 ．8 0 0 ( G G A A C C A A A C A C A T G A A G A ) ，T r a pP C R 擴增共得到1 9 7 個清晰譜帶，其中1 8 2 個具多態(tài)性( 9 2 ．

8、4 ％) ，擴增片段大小從7 5 b p 到7 0 0 b p 。用C r o s s c h e c k e r 程序?qū)U增產(chǎn)物進行分析。將所得2 進制的數(shù)據(jù)傳入N T S Y S p e 2 ．1 l S 得出相似性系數(shù)S C ( s i m i l a r i t y c o e f f i c i e n t ) 矩陣，并用非加權(quán)算術(shù)平均法( U P G M A ) 進行聚類分析。T R A P 在研究蘋果屬植物上是非常有用的標