利用病原真菌毒素離體篩選番茄抗灰霉病突變體.pdf

1、由灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）引起的灰霉病是番茄保護(hù)地栽培中常見的病害之一，該病菌能侵染番茄的莖、葉、花、果，給番茄生產(chǎn)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前主要采用化學(xué)藥劑防治灰霉病，但長期使用農(nóng)藥會造成環(huán)境污染、病菌產(chǎn)生抗藥性等問題，種植抗病品種是防治灰霉病最經(jīng)濟(jì)有效的方法。目前缺少抗灰霉病的番茄栽培品種，抗性資源主要存在野生番茄中，但野生番茄在利用上存在一定的困難，因此迫切需要尋找一種有效的育種方法。
　　 本研究以番

2、茄品種‘蘇粉9號’為試驗(yàn)材料，在研究灰霉菌毒素培養(yǎng)條件的基礎(chǔ)上，以灰霉病菌粗毒素為篩選壓，對番茄愈傷組織進(jìn)行抗病突變體離體篩選，獲得再生植株，并分析毒素處理后細(xì)胞系及其再生植株的酶活性。試驗(yàn)如下:
　　 1.用番茄胚根生長抑制法研究了灰霉菌產(chǎn)毒毒素條件，同時(shí)對毒素進(jìn)行生物活性測定;試驗(yàn)還采用薄層層析法對粗毒素進(jìn)行初步分離。結(jié)果表明，灰霉病菌的最佳產(chǎn)毒條件為pH值為5.0～6.0的PD液體培養(yǎng)基，在20～25℃黑暗條件下連續(xù)靜置培

3、養(yǎng)20d;經(jīng)毒素處理后，葉片出現(xiàn)褪綠斑，幼苗萎焉;粗毒素經(jīng)薄層層析分離出四種組分，各組分在生物活性上有差異。
　　 2.本研究以灰霉菌粗毒素為選擇劑，利用多步篩選法進(jìn)行抗性突變體離體篩選。結(jié)果表明:粗毒素對番茄愈傷組織的誘導(dǎo)、生長和分化具有抑制作用，且抑制作用隨著粗毒素濃度的升高而增強(qiáng);在最高粗毒素濃度為40％的多步篩選下，獲得了抗性愈傷組織并對再生植株進(jìn)行接菌鑒定，原始植株作對照，結(jié)果表明由抗性愈傷組織再生出的植株病情指數(shù)39

4、.00，而對照病情指數(shù)為80.00，抗病效果達(dá)51.25％。
　　 3.用不同濃度的粗毒素處理突變型愈傷組織及再生植株和原始型愈傷組織及再生植株，研究了不同處理時(shí)間后材料的過氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性變化。結(jié)果表明，粗毒素處理后，愈傷組織和植株酶活性有相同的變化趨勢，即先升高后降低;酶活性峰值出現(xiàn)在不同的時(shí)間段，但突變型愈傷組織及其再生植株的酶活性高于原始型愈傷組織及其再生植株;用于處