梨抗黑星病突變體離體篩選.pdf

1、以碭山酥梨材料，以葉片為外植體，建立了碭山酥梨葉片高效再生體系。通過(guò)梨黑星病病原菌培養(yǎng)和粗毒素提取，研究了梨黑星病病原菌粗毒素的產(chǎn)生條件和毒素生物活性。同時(shí)，研究了梨黑星菌粗毒素對(duì)不同抗性梨品種離體葉片生理特性的影響。最后，以碭山酥梨葉片為外植體，以梨黑星病病原菌培養(yǎng)濾液即粗毒素作為篩選劑，采用一步篩選法和多步篩選法，在不同濃度毒素的培養(yǎng)基上篩選抗性愈傷組織，建立了抗梨黑星病的篩選體系，獲得了抗病突變體植株。主要研究結(jié)果如下：

2、1.以碭山酥梨葉片為外植體，首次系統(tǒng)地研究了基本培養(yǎng)基、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、碳源、暗培養(yǎng)時(shí)間和瓊脂用量等對(duì)其再生不定芽的影響。結(jié)果表明，碭山酥梨葉片再生不定芽的適宜組合為NN69+6-BA 2.5mg·L<'-1>+IBA 0.3mg·L<'-1>+山梨醇20g·L<'-1>+瓊脂8.0 g·L<'-1>，暗培養(yǎng)20d。葉片再生頻率最高為83％，平均再生芽數(shù)2.17。葉片再生苗在生根培養(yǎng)基1/4 MS+IBA 0.5mg·L<'-1>+NA

3、A 0.3mg·L<'-1>+蔗糖20g·L<'-1>+瓊脂6.0g·L<'-1>上已經(jīng)生根。 2.研究了梨黑星病病原菌株在不同培養(yǎng)基、光照、溫度、pH值、培養(yǎng)時(shí)間和震蕩培養(yǎng)方式等條件下產(chǎn)生毒素的情況，并用碭山酥梨種子發(fā)芽法，葉片測(cè)定法，試管苗根、莖生長(zhǎng)測(cè)定法檢測(cè)了毒素的毒性。結(jié)果表明，適宜梨黑星病菌粗毒素培養(yǎng)的培養(yǎng)基為PDA液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基pH值為6.0，培養(yǎng)溫度22℃，在黑暗下110 r·min<'-1>連續(xù)震蕩培養(yǎng)22d

4、時(shí)產(chǎn)生的毒素毒性最強(qiáng)。采用四種方法都可檢測(cè)到毒素的活性。 3.以不同抗病性梨品種為材料，研究了梨黑星菌粗毒素對(duì)梨離體葉片的過(guò)氧化物酶(POD)活性、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性、丙二醛(MDA)含量、細(xì)胞膜相對(duì)透性以及葉綠素含量變化的影響。結(jié)果表明，毒素接種后抗病和感病品種葉片的POD和PAL活性、MDA含量和相對(duì)電導(dǎo)率均呈上升趨勢(shì)，其間會(huì)有一個(gè)或兩個(gè)峰值出現(xiàn)，且抗病品種葉片的POD和PAL活性高于感病品種，而細(xì)胞內(nèi)MDA含量和

5、相對(duì)電導(dǎo)率增加比率低于感病品種；同時(shí)，毒素使梨離體葉片的葉綠素、類胡蘿卜素含量下降，且感病品種的下降幅度大于抗病品種。總體來(lái)說(shuō)，梨離體葉片POD和PAL的活性變化與梨品種抗病性呈正相關(guān)，葉片MDA含量和相對(duì)電導(dǎo)率變化與梨品種抗病性呈負(fù)相關(guān)，抗病品種對(duì)毒素的毒害有更好的抵抗力。 4.用碭山酥梨的葉片及其產(chǎn)生的愈傷組織作為篩選材料，以梨黑星病病原菌粗毒素為篩選壓力，采用一步篩選法和多步篩選法，篩選梨抗黑星病突變體。結(jié)果表明：碭山酥梨