利用氨磺靈(Oryzalin)進行蘿卜四倍體質創(chuàng)新研究.pdf

1、蘿卜(Raphanus sativus L.)，十字花科蘿卜屬一、二年生草本植物，染色體數(shù)2n=2x=18，是一種原產中國的重要蔬菜作物。多倍體育種能夠提高作物產量，改善品質和抗性，作為中間橋梁促進植物遺傳進化。新型微管抑制劑氨磺靈(Oryzalin作為秋水仙素的替代品也可以抑制有絲分裂后期紡錘絲的形成，從而實現(xiàn)細胞內染色體加倍，同時還可以彌補秋水仙素誘導存在的弊端。對于Oryzalin誘導蘿卜染色體加倍的效果、四倍體蘿卜育性降低的機理

2、以及不同倍性蘿卜基因表達的研究還未見報道。本研究以二倍體蘿卜‘Nau-DY’和(’)Nau-ZQH’為試材，利用生長點滴定法和浸種法，對Oryzalin和秋水仙素誘導蘿卜染色體加倍的效果進行比較;利用多倍體普遍存在的早期形態(tài)和細胞學特征對誘變植株進行初步篩選，染色體計數(shù)法最終確定植株倍性，為蘿卜四倍體的高效誘導和倍性鑒定提供理論依據(jù);采用常規(guī)制片法對四倍體植株花粉母細胞減數(shù)分裂的異?，F(xiàn)象進行觀察;通過mRNA差異顯示技術，進行不同倍性蘿

3、卜差異表達基因的分離鑒定，以期為解析多倍化的分子遺傳機制提供理論依據(jù)。研究結果如下:
　　 以‘Nau-DY’和‘Nau-ZQH’兩種不同基因型的蘿卜為材料于兩葉一心時進行滴定處理。以清水和0.1％秋水仙素處理分別為對照，同時對以上兩個不同基因型的蘿卜品種于早9點和晚4點各滴定1次連續(xù)3天，研究不同濃度Oryzalin(0.01，0.02，0.04，0.06mM)誘導蘿卜染色體加倍的效果。結果表明，在處理的2個蘿卜品種中均得到了

4、同源四倍體，并以0.04 mM的濃度處理得到的加倍效果最好:誘變率分別為30％(Nau-DY)和26.67％(Nau-ZQH)，高于秋水仙素誘變效果16.67％和23.33％。經(jīng)過不同濃度誘導劑浸泡，有些根尖表現(xiàn)加粗且根毛增多的現(xiàn)象，但是移栽到基質中卻不能成活。本實驗以染色體計數(shù)法最終確定植株的倍性，發(fā)現(xiàn)四倍體中染色體數(shù)目為二倍體的2倍。
　　 以誘導加倍的同源四倍體及其對應的二倍體蘿卜為材料，觀察花粉母細胞減數(shù)分裂過程，用熒光

5、染色法對它們的花粉原位萌發(fā)和花粉管伸長過程進行研究。結果表明:四倍體花粉粒整齊度差，并出現(xiàn)干癟花粉粒且萌發(fā)率低;花粉管伸長較慢且不整齊;花粉母細胞在減數(shù)分裂各個時期均出現(xiàn)不同程度的染色體異常行為。這些因素均從不同程度上影響四倍體蘿卜的育性。
　　 在二倍體和同源多倍體植物中，某些基因表達時可能表現(xiàn)出等位基因的劑量效應，包括一些與植物生長發(fā)育和抗性相關的調節(jié)基因。本實驗采用mRNA差異顯示(DDRT-PCR)技術，分離蘿卜二倍體‘