3種重要經(jīng)濟(jì)頭足類微衛(wèi)星標(biāo)記的分離及特性研究.pdf

1、長(zhǎng)蛸(Octopus minor)、真蛸(Octopus vulgaris)、萊氏擬烏賊(Sepioteuthislessoniana)是經(jīng)濟(jì)頭足類,其肉嫩味美、營(yíng)養(yǎng)豐富,是深受世界各地人們喜愛(ài)的美食。近年來(lái),生存環(huán)境的破壞、過(guò)度捕撈等使其自然資源遭到破壞。因此,開(kāi)展種群遺傳結(jié)構(gòu)調(diào)查對(duì)其資源保護(hù)具有極其重要的意義。微衛(wèi)星標(biāo)記以其共顯性,高多態(tài)性等特點(diǎn)成為研究遺傳結(jié)構(gòu)和生物進(jìn)化的有力工具。本研究應(yīng)用磁珠選擇法從基因組中分離了3種頭足類的微

2、衛(wèi)星位點(diǎn),共獲得微衛(wèi)星序列230條,分析其多態(tài)性,并向GenBank提交微衛(wèi)星序列53條。
　　目前,頭足類中微衛(wèi)星位點(diǎn)的開(kāi)發(fā)工作還處在起步階段,長(zhǎng)蛸、萊氏擬烏賊的微衛(wèi)星位點(diǎn)未見(jiàn)報(bào)道,而真蛸也只有Greatorex等(2000)開(kāi)發(fā)的6個(gè)位點(diǎn),這遠(yuǎn)不能滿足頭足類種質(zhì)資源調(diào)查和遺傳多樣性研究的需要。本實(shí)驗(yàn)采集山東榮成(37.16°N,122.41°E)的長(zhǎng)蛸,福建霞浦(26.89°N,120.00°E)的真蛸,海南陵水(18.48°

3、N,110.02°E)的萊氏擬烏賊野生個(gè)體,應(yīng)用磁珠雜交富集法進(jìn)行了微衛(wèi)星位點(diǎn)的分離。從長(zhǎng)蛸富集文庫(kù)中PCR篩選625個(gè)菌落,挑取115個(gè)克隆測(cè)序,最后設(shè)計(jì)了50對(duì)引物,經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠檢測(cè)獲得12個(gè)多態(tài)性微衛(wèi)星位點(diǎn);篩選真蛸250個(gè)菌落,挑取70個(gè)克隆測(cè)序,設(shè)計(jì)55對(duì)引物,最后篩選出17個(gè)多態(tài)性位點(diǎn);挑取360個(gè)萊氏擬烏賊菌落進(jìn)行PCR篩選,送97個(gè)克隆測(cè)序,共設(shè)計(jì)引物52對(duì),24個(gè)位點(diǎn)具有多態(tài)性。
　　采集野生群體檢測(cè)其多態(tài)性

4、,等位基因數(shù)目、觀測(cè)雜合度、期望雜合度等參數(shù)被用來(lái)評(píng)估每個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性水平。長(zhǎng)蛸12個(gè)位點(diǎn)中,等位基因數(shù)為2-11,平均值為5.4;觀測(cè)雜合度為0.200-1.000,平均0.635;期望雜合度為0.235-0.869,平均0.630。真蛸17個(gè)位點(diǎn)中,等位基因數(shù)位3-17,平均值為8.5;觀測(cè)雜合度0.154-1.000,平均0.809;期望雜合度為0.214-0.925,平均0.750。萊氏擬烏賊24個(gè)位點(diǎn),等位基因數(shù)為4-26,平