毛竹微衛(wèi)星分子標記的開發(fā)和應用.pdf

1、毛竹(Phyllostachys pubescens)是禾本科(Gramineae)竹亞科(Bambusoideae)剛竹屬(Phyllostachys)植物。竹類植物生長快,用途廣,具有重要的經(jīng)濟價值和良好的水土保持功能,利用價值極高。毛竹是我國竹類資源中最主要的竹種之一,它分布廣,利用多,是部分山區(qū)農(nóng)民致富的重要產(chǎn)業(yè),具有很大的經(jīng)濟、社會和生態(tài)意義。但由于其繁殖方式是以地下鞭延伸為主的無性繁殖,個體區(qū)分非常困難,從而造成竹子分類和親

2、緣關(guān)系的混亂以及遺傳多樣性研究的困難。 分子標記是進行竹子遺傳多樣性分析、分類和系統(tǒng)演化等研究的有效手段。微衛(wèi)星(SSR)是指由1-6個核苷酸為單位,串聯(lián)重復的DNA序列,廣泛分布于真核生物的整個基因組中。微衛(wèi)星標記具有共顯性、多態(tài)性高、重復性好等優(yōu)點,是比較理想的分子標記,已在遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位、遺傳多樣性分析、親緣關(guān)系鑒別等方面有廣泛的應用。目前國內(nèi)對竹類植物的微衛(wèi)星研究還很少,沒有開發(fā)出真正的標記位點,限制了對竹子這些

3、領(lǐng)域的研究。 本文開展毛竹微衛(wèi)星開發(fā)與應用的研究,主要從兩個方面來進行。一是通過構(gòu)建毛竹的微衛(wèi)星富集文庫,從文庫中分離出SSR序列：以生物素標記的(CT)10為探針,同毛竹基因組DNA的Bfal酶切片段進行雜交,借助磁珠篩選出含有微衛(wèi)星的片段。轉(zhuǎn)化入質(zhì)粒載體后得到80個陽性克隆,進行測序后發(fā)現(xiàn)含有3個微衛(wèi)星序列(3.75％);另一種是利用生物信息學的手段,通過搜索數(shù)據(jù)庫來得到微衛(wèi)星序列。利用軟件RepeatMasker在線對15

4、32條毛竹核酸序列進行微衛(wèi)星統(tǒng)計,發(fā)現(xiàn)了30個微衛(wèi)星位點(1.96％)。 SSR微衛(wèi)星的應用研究也包括兩個方面：一是運用微衛(wèi)星標記研究毛竹的遺傳多樣性；二是探討在毛竹上開發(fā)的微衛(wèi)星位點在其它剛竹屬竹種中的通用性。具體包括：用這些引物,在11個毛竹變種或栽培種進行擴增,看是否有較好的多態(tài)性。目前已用14對引物進行了擴增,還未發(fā)現(xiàn)多態(tài)性條帶。 用引物對剛竹屬6個竹種的基因組DNA進行擴增,對符合要求的條帶測序,看是否有通用的