大菱鲆與生長、耐高溫性狀相關(guān)的微衛(wèi)星標(biāo)記篩選及微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)研究.pdf

1、大菱鲆（Scophthalmus maximus L．）是我國重要的海水養(yǎng)殖魚類，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近年來，大菱鲆的種質(zhì)退化現(xiàn)象較為嚴(yán)重。為保證我國大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)的健康、穩(wěn)定、可持續(xù)發(fā)展，目前已開始對其進(jìn)行遺傳改良。本文中系統(tǒng)闡述了國內(nèi)外鲆鰈魚類育種的研究進(jìn)展。根據(jù)當(dāng)前國際上魚類遺傳育種的研究趨勢，認(rèn)為采用選擇育種與分子遺傳標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合的方法對其進(jìn)行遺傳改良，可望提高育種成效。因此，本研究以大菱鲆為材料，篩選了與生長、耐高溫

2、性狀相關(guān)的微衛(wèi)星標(biāo)記，并進(jìn)行了大菱鲆微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)研究。 主要結(jié)果如下： 為了揭示出一些影響魚類生長發(fā)育速度方面的遺傳信息，本文利用分群分離分析法，以同一批受精卵孵化的同池養(yǎng)殖大菱鲆（Scophthalmus maximus L．）生長性狀發(fā)生分離的群體為材料，進(jìn)行微衛(wèi)星DNA遺傳分析。30個多態(tài)性微衛(wèi)星位點(diǎn)對生長高值組（F組）和生長低值組（S組）各10個樣本建立的DNA混合池進(jìn)行擴(kuò)增時，在兩池間出現(xiàn)了7個差異片段。通

3、過對兩組大菱鲆個體PCR擴(kuò)增出的差異條帶進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，分析微衛(wèi)星位點(diǎn)與大菱鲆生長性狀的相關(guān)性。結(jié)果表明，有1個微衛(wèi)星位點(diǎn)SmaC10在355bp的等位基因片段與大菱鲆生長性狀存在一定的負(fù)相關(guān)性；有4個微衛(wèi)星位點(diǎn)SmaC02、SmaC06、SmaC09、B11-I12/6/3分別在258bp、182bp、226bp、175bp的等位基因片段與大菱鲆生長性狀存在正相關(guān)性，其中位點(diǎn)Smac09在226bp的等位基因片段與生長性狀的正相關(guān)性極顯著，

4、相關(guān)系數(shù)達(dá)到0．354（P<0．01）。微衛(wèi)星位點(diǎn)SmaC09所擴(kuò)增出的等位基因片段可作為具有良好生長特性人工選育群體的分子標(biāo)記指導(dǎo)大菱鲆的輔助育種。 采用微衛(wèi)星分子標(biāo)記技術(shù)分析大菱鲆耐高溫相關(guān)特性，為大菱鲆的分子輔助育種提供合適的分子標(biāo)記。大菱鲆經(jīng)過耐高溫實(shí)驗(yàn)處理，將其區(qū)分為耐高溫組與不耐高溫組，用于實(shí)驗(yàn)分析。采用Salah．M（1997）的方法提取大菱鲆肌肉組織的DNA，進(jìn)行微衛(wèi)星引物PCR（SSR-PCR）擴(kuò)增，所用引物為

5、已知的30個大菱鲆微衛(wèi)星位點(diǎn)的側(cè)翼保守序列。對PCR擴(kuò)增出的差異條帶進(jìn)行個體統(tǒng)計(jì)，最后進(jìn)行微衛(wèi)星位點(diǎn)與耐高溫性狀的相關(guān)性分析。結(jié)果表明，有1個微衛(wèi)星位點(diǎn)Sma-USC25478bp的等位基因片段與大菱鲆耐高溫性狀存在一定的負(fù)相關(guān)性；有3個微衛(wèi)星位點(diǎn)Sma-USC24、Sma-USC27、Sma-USC31分別在106bp、286bp、135bp的等位基因片段與大菱鲆耐高溫性狀存在正相關(guān)性，其中位點(diǎn)Sma-USC27286bp的等位基因片

6、段與耐高溫性狀的正相關(guān)性極顯著，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0．383（P<0．01），其余3個位點(diǎn)為一般顯著性相關(guān)。微衛(wèi)星位點(diǎn)Sma-USC27所擴(kuò)增出的差異等位基因片段可作為分子標(biāo)記指導(dǎo)耐熱大菱鲆的輔助育種。 利用FIASCO的方法構(gòu)建了大菱鲆以（GT）。為主的微衛(wèi)星DNA富集文庫，檢測結(jié)果證明該微衛(wèi)星DNA文庫的富集效率在43％左右。測序得到88條含有微衛(wèi)星DNA的序列的克隆，共得到91個微衛(wèi)星DNA位點(diǎn)。在這些微衛(wèi)星DNA位點(diǎn)中，除（C