Scriptaid和咖啡因?qū)d羊體細(xì)胞核移植效果的影響研究.pdf

1、體細(xì)胞核移植技術(shù)對于動物育種、地方優(yōu)良資源保存、瀕危動物保護(hù)以及發(fā)育生物學(xué)基礎(chǔ)理論研究等均具有重要意義,但目前體細(xì)胞核移植成功率較低,已成為制約這一技術(shù)應(yīng)用的主要障礙,因此完善體細(xì)胞核移植技術(shù)體系,探明核移植技術(shù)機(jī)理乃是當(dāng)前急需解決的難題。
　　 本研究采用組蛋白去乙?；敢种苿猄criptaid處理綿羊核移植供體細(xì)胞以及核移植胚胎以提高其組蛋白乙?；?探討了組蛋白乙?；降奶岣邔d羊體細(xì)胞核移植胚胎體外發(fā)育的影響。另

2、外,對咖啡因在核移植胚胎體外發(fā)育過程中的作用也進(jìn)行了研究。
　　 為了提高綿羊體細(xì)胞核移植效率,以綿羊卵丘細(xì)胞為核供體,在融合后的核質(zhì)互作期間加入咖啡因,結(jié)果表明,咖啡因濃度以2.5mmol/L或5mmol/L為宜。雖然卵裂率、桑椹胚率以及囊胚發(fā)育率與對照組差異不顯著(P＞0.05),但囊胚細(xì)胞數(shù)顯著高于對照組(P＜0.05)。
　　 采用不同濃度Scriptaid處理綿羊卵丘細(xì)胞,結(jié)果表明,以0.2μmol/L Scr

3、iptaid處理組核移植胚胎囊胚發(fā)育率最高,達(dá)24.39％,顯著高于對照組和0.8μmol/L處理組(P＜0.05)。在對胚胎體外培養(yǎng)的過程中加入Scriptaid,結(jié)果顯示仍以0.2μmol/L處理組囊胚發(fā)育率最高,達(dá)24.31%,顯著高于對照組和0.8μmol/L處理組(P＜0.05)。盡管采用0.2μmol/L Scriptaid分別處理綿羊供體卵丘細(xì)胞和核移植胚胎時,囊胚發(fā)育率顯著提高(P＜0.05),但采用0.2μmol/L

4、Scriptaid同時處理供體卵丘細(xì)胞和核移植胚胎時的囊胚發(fā)育率反而明顯降低,但與前兩者不顯著(P＞0.05),這很可能與Scriptaid對細(xì)胞有一定的毒性。
　　 在激活后對胚胎進(jìn)行培養(yǎng)的過程中,用0.2μmol/L Scriptaid對核移植胚胎進(jìn)行不同時間的處理后發(fā)現(xiàn),處理24h和48h對核移植胚胎的囊胚率分別為24.94%和24.27%,顯著高于對照組和96h處理組(P＜0.05),但是24h和48h處理組之間差異不顯

5、著(P＞0.05)。
　　 在綿羊核移植胚胎體外培養(yǎng)時加入0.2μmol/L Scriptaid,35天妊娠率顯著高于對照組(P＜0.05)。
　　 對0.2μmol/L Scriptaid處理綿羊卵丘細(xì)胞獲得的不同發(fā)育時期核移植胚胎進(jìn)行免疫熒光染色,結(jié)果表明,1-細(xì)胞至8-細(xì)胞期的胚胎中H4K12乙?；斤@著高于對照組,但囊胚中H4K12乙?；讲町惒伙@著;并且試驗組和對照組囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層細(xì)胞間H4K12乙酰