桿狀病毒介導(dǎo)RNAi抑制棉鈴蟲超量表達(dá)的細(xì)胞色素P450基因的轉(zhuǎn)錄.pdf

1、由于化學(xué)殺蟲劑的大量使用，一些主要農(nóng)業(yè)害蟲對化學(xué)殺蟲劑產(chǎn)生的抗藥性問題越來越嚴(yán)重。細(xì)胞色素P450酶系是昆蟲對化學(xué)殺蟲劑和植物毒素解毒的重要酶系，P450酶活性的增強(qiáng)與棉鈴蟲對擬除蟲菊酯類殺蟲劑和植物毒素產(chǎn)生抗藥性有關(guān)。RNAi是近年來產(chǎn)生的一項新興生物技術(shù)，是利用dsRNA誘導(dǎo)序列特異的轉(zhuǎn)錄后基因沉默，能夠?qū)Χ喾N生物中的基因進(jìn)行沉默。
　　 本實驗選擇與擬除蟲菊酯類殺蟲劑抗藥性有關(guān)的棉鈴蟲細(xì)胞色素P450基因CYP9A14、C

2、YP9A17、CYP9A12、CYP6B7以及與植物毒素棉酚抗藥性有關(guān)的基因CYP6AE14，以雙鏈RNA干擾的方法構(gòu)建了含有反向重復(fù)序列的P450基因CYP9A14及其截短片段CYP9A14t、CYP9A17及其截短片段CYP9A17t、CYP9A12、CYP687、CYP6AE14保守片段的重組棉鈴蟲核型多角體病毒(HaNPV)。將重組病毒感染HzAM1細(xì)胞，獲得高滴度的BV后，注射到氯氰菊酯抗性棉鈴蟲幼蟲的血淋巴中。其中感染vHa

3、Bac-CYP9A14t的棉鈴蟲幼蟲中腸的CYP9A14的轉(zhuǎn)錄水平有極顯著的下降，感染vHaBac-CYP9A17t和vHaBac-CYP6AE14的棉鈴蟲幼蟲中腸的CYP9A17和CYP6AE14的轉(zhuǎn)錄水平也有顯著性下降。而感染vHaBac-CYP9A14、vHaBac-CYP9A17、vHaBac-CYP9A12、vHaBac-CYP687和對照病毒vHaBac-EGFP相比，基因的轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有顯著性差異。
　　 生物測定結(jié)

4、果表明棉鈴蟲核型多角體病毒與氯氰菊酯聯(lián)合作用能顯著增強(qiáng)對氯氰菊酯抗性棉鈴蟲幼蟲的殺蟲效果。然而，vHaBac-CYP9A14t與氯氰菊酯聯(lián)合作用的增效程度和對照病毒vHaBac-EGFP與氯氰菊酯聯(lián)合作用的增效程度相當(dāng)。同樣，vHaBac-CYP9A14t與vHaBac-CYP9A17t等濃度等體積混合的病毒與氯氰菊酯聯(lián)合作用的增效程度也和對照病毒vHaBac-EGFP與氯氰菊酯聯(lián)合作用的增效程度相當(dāng)。
　　 本實驗證明以棉鈴蟲