桿狀病毒介導的內(nèi)耳基因治療的實驗研究.pdf

1、[目的] 研究重組桿狀病毒作為內(nèi)耳基因轉染載體的可行性及其轉染特點。 [方法] 應用Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統(tǒng)制備重組桿狀病毒Bac-GFP，以不同MOI的病毒和不同濃度的丁酸鈉轉染螺旋神經(jīng)節(jié)細胞，通過熒光共聚焦顯微鏡和流式細胞儀檢測細胞轉染率和綠色熒光蛋白表達強度，并檢測桿狀病毒和丁酸鈉對螺旋神經(jīng)節(jié)細胞的毒性。建立新生大鼠耳蝸Corti 器體外模型，加入攜帶報告基因的病毒懸液,觀察外源基因表達情況。 [結果]

2、 桿狀病毒可以高效轉染螺旋神經(jīng)節(jié)細胞,轉染效率可以高達77.69％。Bac-GFP轉染率和表達強度隨著MOI和丁酸鈉濃度的提高而提高。GFP6小時開始表達，在第2天表達量最高。重組桿狀病毒在MOI值為800和丁酸鈉終濃度小于或等于10 mM時，對螺旋神經(jīng)節(jié)細胞沒有明顯細胞毒性。耳蝸Corti 器體外培養(yǎng)48小時后,培養(yǎng)組織生長良好。Bac-GFP聯(lián)合丁酸鈉可以高效轉染毛細胞和螺旋神經(jīng)節(jié)細胞, 同時并沒有改變Corti器的正常結構。