內(nèi)皮祖細胞介導的TRAIL基因治療肝癌的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗通過研究內(nèi)皮祖細胞介導的TRAIL基因?qū)π∈蟾伟〩22細胞皮下移植瘤的影響，探索TRAIL基因轉(zhuǎn)染內(nèi)皮祖細胞對肝癌的治療作用，為臨床應用TRAIL基因治療肝癌提供理論基礎。
　　方法：消化收集小鼠骨髓來源的單核細胞，通過內(nèi)皮祖細胞特有的EGM-2培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，經(jīng)熒光及流式細胞儀鑒定，通過PCR擴增TRAIL基因，將TRAIL基因與pcDNA3.1載體連接，采用腺病毒轉(zhuǎn)染入內(nèi)皮祖細胞中，并用western blot進行

2、TRAIL基因的表達鑒定。通過腹腔接種方法培養(yǎng)小鼠肝癌H22細胞，建立小鼠皮下移植瘤動物模型，隨機分為3組，第一組用生理鹽水為對照，經(jīng)尾靜脈注射，第二組用空載腺病毒轉(zhuǎn)染內(nèi)皮祖細胞，經(jīng)尾靜脈注射，第三組用攜帶TRAIL基因的重組腺病毒轉(zhuǎn)染內(nèi)皮祖細胞，經(jīng)尾靜脈注射，分別觀察治療效果。統(tǒng)計學處理：數(shù)據(jù)采用SPSS11.0軟件處理，結(jié)果以均數(shù)±標準差表示，應用t檢驗進行統(tǒng)計學分析，以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：小鼠骨髓來源的單

3、核細胞經(jīng)EGM-2培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)后，為內(nèi)皮祖細胞。構(gòu)建TRAIL基因與pcDNA3.1的重組質(zhì)粒，經(jīng)酶切及測序鑒定，重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。與空載腺病毒相比，western blot檢測發(fā)現(xiàn)TRAIL基因有表達?？蛰d體組的抑瘤率為20.98％，但經(jīng)統(tǒng)計學分析與對照組無顯著性差異，轉(zhuǎn)染TRAIL基因組的抑瘤率為47.77％，與對照組有顯著性差異。
　　結(jié)論：成功培養(yǎng)了內(nèi)皮祖細胞，成功構(gòu)建了TRAIL基因與pcDNA3.1的重組質(zhì)粒，將該重