腺病毒介導(dǎo)的小鼠內(nèi)皮抑素基因治療G422膠質(zhì)母細胞瘤的實驗.pdf

1、一、重組腺病毒的制備及其對腫瘤細胞、內(nèi)皮細胞生長的作用目的:制備高濃度、高純度攜有小鼠內(nèi)皮抑素基因的重組腺病毒,測定該病毒體外對效應(yīng)細胞的轉(zhuǎn)染率,明確轉(zhuǎn)染后腫瘤細胞能夠表達內(nèi)皮抑素,觀察攜有目的基因的重組腺病毒轉(zhuǎn)染后對腫瘤細胞及內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)時生物學(xué)特性變化.結(jié)論:該實驗重組腺病毒經(jīng)擴增、純化和濃縮后,Ad-mEnd病毒滴度為5×1010pfu/ml,在MOI=100時,病毒對G422的轉(zhuǎn)染率大于90﹪;重組腺病毒攜帶的內(nèi)皮抑素基因經(jīng)

2、RT-PCR,Western-blot等檢測,證實得到有效表達;攜有內(nèi)皮抑素基因的重組腺病毒轉(zhuǎn)染可抑制內(nèi)皮細胞增殖,促進內(nèi)皮細胞凋亡,而對G422細胞沒有影響,為下一步體內(nèi)實驗打下基礎(chǔ).二、基因治療荷瘤小鼠膠質(zhì)母細胞瘤體內(nèi)轉(zhuǎn)染率測定目的:測量基因治療用腺病毒在荷瘤鼠腫瘤體內(nèi)的轉(zhuǎn)染率,明確該基因治療最佳病毒注射劑量和病毒注射方法.結(jié)論:病毒注射量、注射方法和時間三個因素共同決定該腺病毒的體內(nèi)轉(zhuǎn)染率,轉(zhuǎn)染率與各組間不存在有一階和二階的交互作

3、用,實驗提示當注射病毒量為MOI=250,腫瘤局部分多點(4以上)注射用藥,在病毒注射后第7天,檢測到的體內(nèi)轉(zhuǎn)染率最高,可大于45﹪,同時也是基因治療的最佳方法.三、Ad-mEnd基因治療小鼠膠質(zhì)母細胞瘤抑制血管生成的實驗研究目的:通過接種轉(zhuǎn)染有Ad-mEnd基因的G422細胞,觀察小鼠皮下成瘤的時間和成瘤比率;明確荷瘤小鼠瘤體直接注射Ad-mEnd后對膠質(zhì)瘤血管生成和腫瘤生長的抑制效果,分析其中的作用機制.結(jié)論:用Ad-mEnd轉(zhuǎn)染的

4、G422小鼠膠質(zhì)母細胞瘤細胞接種后,能延長腫瘤成瘤時間,減少腫瘤成瘤比率,早期可顯著抑制腫瘤體積生長.腫瘤局部注射重組腺病毒介導(dǎo)的內(nèi)皮抑素基因在小鼠G442瘤體內(nèi)能得到良好表達,多次分點注射可提高內(nèi)皮抑素的表達量,增加治療效果;重組腺病毒介導(dǎo)的內(nèi)皮抑素基因治療可以抑制小鼠G442腫瘤生長,提高荷瘤小鼠生存率,延長生存時間,并可以使部分腫瘤處于長期休眠狀態(tài),荷瘤小鼠長期生存;內(nèi)皮抑素基因有效治療小鼠G442膠質(zhì)母細胞瘤,與內(nèi)皮抑素誘發(fā)內(nèi)皮