家蠶桿狀病毒ie0基因功能的研究.pdf

1、ie0基因是家蠶核型多角體病毒（BmNPV）的一個(gè)晚期基因，該基因編碼氨基酸序列的高度保守性及多種結(jié)構(gòu)域提示其在病毒感染過(guò)程中的重要性。利用Red同源重組技術(shù)，對(duì)BmNPV ie0基因編碼不同結(jié)構(gòu)域的序列以及整個(gè)基因進(jìn)行敲除，構(gòu)建ie0缺失型病毒，以野生型病毒為對(duì)照，研究ie0對(duì)病毒轉(zhuǎn)錄、復(fù)制及對(duì)宿主細(xì)胞致病能力、凋亡等方面的影響。結(jié)果表明ie0基因或編碼各結(jié)構(gòu)域的序列缺失后會(huì)對(duì)病毒產(chǎn)生不同影響：宿主細(xì)胞中完全缺失型和部分缺失型病毒的病

2、毒滴度均有不同程度降低；完全缺失型和部分缺失型病毒基因組的拷貝數(shù)均與野生型病毒無(wú)顯著差別；部分缺失型病毒晚期和極晚期基因的轉(zhuǎn)錄水平變化與ie0基因完全缺失型相一致，均顯著低于野生型病毒，并且缺失鋅指結(jié)構(gòu)域編碼序列的影響最為明顯。MTT檢測(cè)結(jié)果也顯示ie0基因完全缺失后病毒對(duì)宿主細(xì)胞的致病能力有所下降。Western blotting分析顯示ie0基因缺失型病毒轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞中抑制凋亡基因Bcl-2表達(dá)水平無(wú)明顯變化，而促凋亡基因Bax的