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1、王?;ǎ簵U狀病毒A c M N P V 的p 6 .9 基岡在病毒復(fù)制過程中的功能研究中文摘要英文摘要符號(hào)說明目錄第一章文獻(xiàn)綜述??1 .1 桿狀病毒簡介??????????????????????????????71 .2 桿狀病毒的分類?????????????????????????????7l - 3 桿狀病毒的感染周期???????????????????????????91 .3 .1 桿狀病毒對(duì)蟲體的感染。1 .3 .2
2、桿狀病毒的離體復(fù)制1 .3 .2 .1 病毒的侵入1 .3 .2 .2 病毒復(fù)制的準(zhǔn)備1 .3 .2 .3 病毒D N A 復(fù)制和B V s 產(chǎn)生1 .3 .2 .4P D V s 和包涵體的產(chǎn)生?1 01 11 21 21 21 .4 桿狀病毒基因組????????????????????????????l 31 .5 桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)?????????????????????????一1 31 .5 .1 桿狀病毒表達(dá)載體的特點(diǎn)
3、1 .5 .2B a c - t o .B a c 操作系統(tǒng)1 4?.....1 51 .6A c M N P V p 6 .9 基因背景知識(shí)簡介?????????????????????.1 61 .7 本實(shí)驗(yàn)的研究目的和研究意義??????????????????????.1 7第二章A c M N P V p 6 .9 基因的克隆,原核表達(dá),蛋白純化及抗體制各??????。1 82 .1 材料???????。2 .1 .1 菌株和
4、質(zhì)粒2 .1 .2 酶及試劑¨1 8..1 82 .1 .3 培養(yǎng)基及電泳緩沖液。2 .1 .4S D S .P A G E 電泳所需試劑..?????1 9.1 9.1 9.2 0.2 0.2 1.2 1.2 1.2 2.2 3.2 3.2 3.2 3.2 4.2 4.2 5.2 52 .1 .5 S D S .P A G E 電泳凝膠的灌制2 .1 .6 引物2 .2 方法?????????2 .2 .1 大腸桿菌中質(zhì)粒的
5、提取方法。2 .2 .2 大腸桿菌中B a e m i d 的提取法2 .2 .3 試劑盒回收D N A 片段2 .2 .4 C a C l 2 法制備感受態(tài)細(xì)胞???????.2 .2 .5 p 6 .9 基因的克隆及重組表達(dá)載體的構(gòu)建2 .2 .6 重組表達(dá)載體的誘導(dǎo)表達(dá)及其親和層析純化2 .2 .6 .1 M B P .P 6 .9 融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及菌液破碎2 .2 .6 .2 S D S .P I A G E ?.2 .2
6、.6 .3 親和層析法純化M B P .P 6 .9 融合蛋白2 .2 .7 P 6 .9 蛋白的抗血清制備2 .3 結(jié)果2 .3 .1p 6 .9 基因的克隆及重組表達(dá)載體的構(gòu)建2 .3 .2 重組表達(dá)載體的誘導(dǎo)表達(dá)和純化2 52 6王?;ǎ簵U狀病毒A c M N - P V 的p 6 .9 基因在病毒復(fù)制過程中的功能研究 3桿狀病毒A c M N P V 的p 6 .9 基因在病毒復(fù)制過程中的功能研究研究生:王海花導(dǎo)師:梁昌鏞副教授
7、( 揚(yáng)州大學(xué),江蘇揚(yáng)州,2 2 5 0 0 9 )摘要桿狀病毒在所感染的昆蟲宿主細(xì)胞中裝配時(shí),會(huì)進(jìn)行D N A 的壓縮和包裝。有研究表明這與桿狀病毒自身編碼的P 6 .9 蛋白有關(guān)。該蛋白是一種富含精氨酸和絲氨酸的小蛋白,在功能上類似于組蛋白,根據(jù)病毒種類不同,大小在4 9 氨基酸到1 0 9 氨基酸之間。目前已測序的共5 0 多種桿狀病毒基因組中都有p 6 .9 基因,顯示了p 6 .9 基因在桿狀病毒進(jìn)化過程中的保守性。本論文以A
8、c M N P V 為例,對(duì)桿狀病毒p 6 .9 基因的功能進(jìn)行研究。第一章:文獻(xiàn)綜述。概括介紹了桿狀病毒生物學(xué)、分子生物學(xué)研究進(jìn)展和應(yīng)用研究情況,并對(duì)桿狀病毒的p 6 .9 基因進(jìn)行了介紹。最后介紹了本論文的目的和意義。第二章:A c M N P V p 6 .9 基因的克隆、原核表達(dá)和抗體制備。將p 6 .9 基因編碼區(qū)克隆至原核表達(dá)載體p M A L .c 2 x ,獲得p M A L - p 6 .9 表達(dá)質(zhì)粒,經(jīng)I P T G
9、 誘導(dǎo),M B P .P 6 .9 蛋白在大腸桿菌中獲得了高效表達(dá),將表達(dá)產(chǎn)物純化,免疫家兔制備了A c M N P VP 6 .9 蛋白的抗血清。第三章:缺失p 6 .9 基因的A c M N P V 重組病毒的構(gòu)建及其回復(fù)拯救。利用B a g - t o .B a g操作系統(tǒng),構(gòu)建了缺失p 6 .9 基因的重組B a c m i dv A c p 6 ·啪,利用轉(zhuǎn)座方法得到拯救型,缺失型和野生型B a g m i d :v
10、 A c P h - g f p - p 6 .9 - r e p ,v A c P h - g f P 嘶·‰與v A c P h ' g f P 。將三種B a c m i d 同時(shí)轉(zhuǎn)染和感染S f 9 細(xì)胞系.結(jié)果發(fā)現(xiàn),缺失了p 6 .9 基因的A c B a g m i d 不能完成病毒的整個(gè)復(fù)制過程,而拯救型和野生型卻可以,且具有相似的復(fù)制動(dòng)力曲線。這表明p 6 .9 基因是A c M N P V復(fù)制的必需基
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