家蠶桿狀病毒晚期表達(dá)因子LEF-10的功能研究.pdf

1、桿狀病毒晚期基因表達(dá)因子(lateexpressionfactors，LEFs)是一類調(diào)控病毒晚期基因表達(dá)的蛋白因子，編碼這些蛋白因子的基因統(tǒng)稱為lef基因。有些lef基因是病毒DNA復(fù)制的必需基因或促進(jìn)基因，有些是在轉(zhuǎn)錄水平行使調(diào)控功能的基因。所有的lef基因都能調(diào)控晚期基因的表達(dá)，是晚期基因表達(dá)的必需因子。
　　 在桿狀病毒基因組上敲除目的基因被公認(rèn)為是研究病毒基因功能的精確、有效的手段，特別是研究目的基因在整個(gè)感染周期中對(duì)

2、病毒DNA復(fù)制和基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用。家蠶桿狀病毒(BmNPV)中的LEF-10與其他晚期表達(dá)因子不具有顯著的同源性，一般被認(rèn)為是一種在轉(zhuǎn)錄過程中的輔助因子，但有關(guān)其在病毒復(fù)制繁殖中的作用機(jī)制還不清楚。在本研究中，我們通過Red重組系統(tǒng)敲除了BmNPV的lef-10基因，構(gòu)建lef-10缺失型Bacmid，再將lef-10啟動(dòng)子和lef-10基因利用Bac-to-Bac系統(tǒng)重新補(bǔ)回到病毒基因組中。將構(gòu)建的缺失型病毒DNA轉(zhuǎn)染BmN細(xì)胞，經(jīng)

3、檢測(cè)病毒滴度為零，而補(bǔ)回型重組病毒恢復(fù)到與野生病毒相似的感染水平，表明lef-10為BmNPV復(fù)制裝配的必需基因。為了進(jìn)一步了解LEF-10的作用機(jī)制，我們研究了lef-10缺失型Bacmid轉(zhuǎn)染細(xì)胞后病毒基因組的復(fù)制情況以及病毒早期、晚期和極晚期基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)情況。結(jié)果表明lef-10缺失后，病毒基因組的復(fù)制水平始終保持在較低水平;病毒早期基因lef-3、晚期基因vp39和極晚期基因p10的轉(zhuǎn)錄水平均明顯低于野生型和補(bǔ)回型重組病毒;