家蠶桿狀病毒vp80，Bm21及家蠶SUMO基因研究.pdf

1、家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nucloepolyhedrivirus，BmNPV)是桿狀病毒的模式病毒之一，它的基因組全長128413bp，編碼136個ORF，本文選擇了一個BV和ODV都含有的結構蛋白基因Bmvp80基因，一個Group1型桿狀病毒特有的基因BmNPVORF21基因進行了研究。同時研究了家蠶的一種新的修飾蛋白SUMO(small ubiquitin-like modifier)及其對BmNPV在BmN細

2、胞中復制的影響。主要結論如下： 1、BmVP80功能研究。 在大腸桿菌中表達了BmVP80部分片段，制備了多克隆抗體，免疫熒光定位發(fā)現(xiàn)BmVP80在細胞核內表達，利用ET重組系統(tǒng)構建了BmVP80敲除的BmBacmid，敲除后的病毒不能產生有侵染能力的BV，將完整的BmVP80異位補回后，敲除的病毒恢復了感染能力。透射電鏡發(fā)現(xiàn)BmVP80敲除后核衣殼的數(shù)量明顯下降。為了研究Bmvp80是否具有種屬特異性，用在不同啟動子啟

3、動下的Acvp80拯救BmVP80敲除的BmBacmid都告失敗，表明Bmvp80有種屬特異性?？偟膩碚fBmvp80是BV產生和核衣殼成熟必需的，并且具有種屬特異性。 2、BmNPVORF21(Bm21)部分功能研究。 Bm21是鱗翅目昆蟲NPV特有的基因，在本實驗中克隆和表達了該基因，RT-PCR分析了Bm21的轉錄時相，發(fā)現(xiàn)在12h.i.開始轉錄，在BmN細胞中利用Bac-to-Bac表達系統(tǒng)間接定位發(fā)現(xiàn)Bm21表達

4、產物在細胞核和細胞質中都有分布。利用ET系統(tǒng)構建了Bm21部分敲除的缺失病毒，轉染細胞沒有發(fā)現(xiàn)明顯的細胞病變，表明Bm21的敲除影響了病毒的復制。 3、家蠶SUMO基因研究。 BmSUMO編碼一個含91個氨基酸的蛋白，序列分析發(fā)現(xiàn)它與SUMO2/3同源性較高(67％)，而與SUMO1只有51.7％的同源性.免疫熒光定位發(fā)現(xiàn)BmSUM0在整個細胞中都有分布，并且在細胞核內呈點狀分布。Westernblot實驗表明在家蠶細胞