家蠶桿狀病毒晚期表達(dá)因子LEF-9的功能研究.pdf

1、家蠶桿狀病毒（BmNPV）中的lef-9與lef-4，lef-8和47共同編碼的蛋白聯(lián)合體的亞基可以在體外啟動(dòng)polh啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄。但是，其在基因轉(zhuǎn)錄中的調(diào)控作用和病毒復(fù)制繁殖中所起的作用還未見報(bào)道。在本研究中，我們借助Red重組技術(shù)成功構(gòu)建了lef-9基因缺失型病毒lef-9-KO-Bacmid，并利用Bac-to-Bac系統(tǒng)構(gòu)建了lef-9基因補(bǔ)回型病毒lef-9-Re-Bacmid。將構(gòu)建好的病毒基因組DNA轉(zhuǎn)染BmN細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)

2、，lef-9缺失型病毒不能生成有感染活性的病毒粒子，而補(bǔ)回型病毒能夠恢復(fù)病毒的感染活性，表明lef-9基因是病毒感染形成有感染活性BV(Buddedvirus)的必需基因。為進(jìn)一步了解lef-9缺失對(duì)BmNPV基因組復(fù)制及基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響，我們以具有代表性的早晚期基因和極晚期基因?yàn)檠芯繉?duì)象，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)技術(shù)研究了lef-9對(duì)病毒復(fù)制和基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用機(jī)制。qPCR研究結(jié)果表明，lef-9缺失后，病毒基因組的復(fù)制

3、未受到明顯影響（P＞0.05）;而病毒早期基因ie-1和lef-3，晚期基因vp39和極晚期基因p10的轉(zhuǎn)錄水平相比較修復(fù)型與野生型病毒而言均有顯著降低（P＜0.05）;Westernblotting結(jié)果也顯示lef-9基因缺失型病毒基本不表達(dá)蛋白LEF-3、VP39和P10(P＜0.05)。同時(shí)，我們利用透射電鏡技術(shù)對(duì)lef-9-KO-Bacmid、lef-9-Re-Bacmid和wtBacmid感染的家蠶BmN細(xì)胞進(jìn)行觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)