生防菌MT-06菌藥混配研究及其TMK1基因克隆與功能驗(yàn)證.pdf

1、為進(jìn)一步探索生防菌MT-06的開發(fā)前景，本文通過與化學(xué)農(nóng)藥混配的方法使在減少化學(xué)農(nóng)藥使用量的同時(shí)防治效果保持不變甚至得到加強(qiáng)。
　　 首先選取6種常用的化學(xué)農(nóng)藥殺菌劑，通過平板測(cè)定殺菌劑對(duì)MT-06的生長抑制率。由于甲基托布津、異菌脲和多菌靈對(duì)MT-06抑制率強(qiáng)，不宜混配，遂將這3種農(nóng)藥排除。測(cè)定其余3種農(nóng)藥百菌清、甲霜錳鋅和代森錳鋅對(duì)MT-06的毒力回歸方程及EC50，進(jìn)而計(jì)算出各農(nóng)藥對(duì)供試病原真菌的TSR(toxicitys

2、elective ratios)值。結(jié)果表明:代森錳鋅對(duì)生防菌MT-06的EC50為0.0595 mg/ml，同時(shí)對(duì)對(duì)番茄早疫病菌、水稻立枯絲核菌及甜瓜蔓枯病菌抑制效果較好，其EC50分別為0.01295 mg/ml、0.01336 mg/ml和0.026 mg/ml。因此，番茄早疫病菌、水稻立枯絲核菌及甜瓜蔓枯病菌3種病原菌的TSR值大于1，分別為4.5946、4.4536和2.2885，表明具有正向選擇性。同樣計(jì)算得出百菌清對(duì)水稻立

3、枯絲核菌和甜瓜蔓枯病菌的TSR值分別為12.9743和18.2633，具有中度正向選擇性。甲霜錳鋅對(duì)各菌的毒力測(cè)定結(jié)果為對(duì)番茄早疫病菌、茭白胡麻斑病菌、水稻立枯絲核菌及甜瓜蔓枯病菌的TSR值分別為13.9277、13.9277、2.89和2.4596。3種農(nóng)藥所得R值分別大于0.91、0.95和0.85。
　　 本研究將1×106個(gè)/ml MT-06孢子與濃度比對(duì)照至少降低50％的化學(xué)農(nóng)藥混配，通過溫室盆栽試驗(yàn)和田間小區(qū)試驗(yàn)對(duì)上

4、述毒力測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證。(1)番茄早疫盆栽試驗(yàn)結(jié)果顯示各處理對(duì)番茄早疫病害的保護(hù)效果均優(yōu)于治療效果。其中0.25mg/ml甲霜錳鋅與1×106個(gè)/ml MT-06孢子混配保護(hù)效果最佳，達(dá)到95.45％，高于對(duì)照2mg/ml的甲霜錳鋅，但差異不顯著。代森錳鋅防效最高的處理是其濃度0.5mg/ml與1×106個(gè)/ml MT-06孢子混配時(shí)達(dá)到的，為90.83％。此外，1mg/ml代森錳鋅與1×106個(gè)/ml MT-06孢子混配的防效86.

5、54％也高于對(duì)照。所有MT-06與藥劑混配處理與對(duì)照防效都顯著高于1×106個(gè)/ml MT-06孢子單獨(dú)使用時(shí)的防治效果。治療試驗(yàn)效果表明，2mg/ml代森錳鋅防效最好。MT-06與農(nóng)藥混配都未能達(dá)到較單劑防效提高的目的，代森錳鋅與MT-06孢子混配的防效顯著低于代森錳鋅農(nóng)藥的對(duì)照。0.5mg/ml的甲霜錳鋅與1×106個(gè)/ml MT-06孢子混配防效達(dá)到73.31％，高于其對(duì)照2mg/ml的甲霜錳鋅的70.63％。(2) MT-06與

6、農(nóng)藥混配防治甜瓜蔓枯病結(jié)果顯示:保護(hù)作用防治效果大于單劑農(nóng)藥對(duì)照的為0.25mg/ml和0.5 mg/ml代森錳鋅與1×106個(gè)/ml MT-06孢子混配后防效，分別為75.40％、71.91％;治療作用防效大于單劑農(nóng)藥對(duì)照同樣為0.25mg/ml和0.5mg/ml代森錳鋅與1×106個(gè)/ml MT-06孢子混配。
　　 MT-06與農(nóng)藥混配防治小麥赤霉病田間小區(qū)試驗(yàn)結(jié)果表明:試驗(yàn)各處理的病情指數(shù)均低于清水對(duì)照，各處理對(duì)小麥赤霉

7、病均有不同程度的防效。防效最好的是稀釋10倍的菌液，防效達(dá)到74.70％，其次是2mg/ml甲霜錳鋅與1×106個(gè)/mlMT-06孢子混配的處理，防效達(dá)到72.62％，兩處理防效均高于對(duì)照4mg/ml甲霜錳鋅71.79％的防效，但差異不顯著。所有菌藥混配處理防效均高于單獨(dú)使用1×106個(gè)/mlMT-06孢子，部分處理防效高于單劑農(nóng)藥對(duì)照，表明MT-06與農(nóng)藥混配可以在不影響防效的情況下大幅度減少農(nóng)藥的使用量。
　　 為研究MT-

8、06的生防分子機(jī)制，根據(jù)絲狀真菌PMK1類同源基因的保守區(qū)設(shè)計(jì)引物，以MT-06基因組DNA為模板擴(kuò)增獲得TMK1基因的保守區(qū)段，進(jìn)而利用TAIL-PCR進(jìn)行染色體步移和RT-PCR獲得TMK1基因全長和cDNA。基因全長2145 bp，包含3個(gè)內(nèi)含子，編碼355氨基酸的蛋白。TMK1預(yù)測(cè)蛋白與Magnaporthe grisea PMK1, Colletotrichum lagenarium CMK1, Botryotiniafuck