羅非魚免疫記憶及體外淋巴細胞增殖的研究.pdf

1、本研究以羅非魚(Tilapia，Oreochromis Niloticus)為研究對象，對其進行腹腔二次注射外源性蛋白-人IgG后，分離其頭腎、脾臟及外周血淋巴細胞進行體內(nèi)外檢測羅非魚免疫應(yīng)答。
　　羅非魚首次及二次免疫后，利用ELISPOT技術(shù)檢測其頭腎、脾臟和外周血中特異性ASC的分布以及用ELISA檢測血清中抗體水平，發(fā)現(xiàn)首次免疫1d后可在頭腎中檢測出ASC；頭腎、外周血以及脾臟中的ASC都在第12d達到最大值，頭腎中的AS

2、C數(shù)量要顯著大于外周血及脾臟的ASC數(shù)量；血清中的抗體也在第12d達到最大值。二次免疫后檢測到羅非魚的頭腎、血液和脾臟中ASC數(shù)量達到最大值的時間均比首次免疫最大值時間要提前3d，頭腎、外周血及脾臟中ASC數(shù)量的最大值分別是首次免疫最大值的2倍、4倍和6倍以上，頭腎中ASC的數(shù)量仍是3種組織中最多的，說明頭腎是ASC及抗體的主要來源，并且是魚類免疫應(yīng)答的主要器官；二次免疫血清抗體水平顯著高于首次免疫。從各組織中ASC增殖的倍數(shù)以及血清中

3、增加的抗體水平來看，羅非魚的二次免疫比首次免疫更快速，效率更高，證明羅非魚具有的免疫記憶。
　　體外培養(yǎng)羅非魚淋巴細胞，MTT檢測發(fā)現(xiàn)受免羅非魚頭腎、脾臟和外周血淋巴細胞在抗原人IgG刺激下均有不同程度增殖，其中外周血淋巴細胞的增殖是三者中最顯著的，其次是頭腎，而脾臟淋巴細胞對抗原刺激的反應(yīng)不明顯；用ELISPOT技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)在未加入抗原條件下，頭腎中ASC體外存活的時間比脾臟和外周血中ASC存活的時間長，而且培養(yǎng)液中抗體水平持續(xù)

4、增加，說明頭腎中的ASC屬于長壽命漿細胞(Long-liveplasma，LPC)；而脾臟和外周血ASC屬于短壽命漿細胞(Short-live plasma，SPC)；加入抗原人IgG后并沒有看到明顯的ASC增殖，而且由于抗原抗體的中和作用，3種組織淋巴細胞的ASC數(shù)量迅速減少，相應(yīng)抗體水平檢測也說明外源性蛋白抗原在體外對淋巴細胞無刺激增殖作用；加入非特異性抗原LPS刺激后，3種組織中的ASC均有明顯增殖，第5d達到最大值，其中以外周血