黑素瘤分泌的PAEP對體外T淋巴細胞免疫抑制作用的研究.pdf

1、惡性黑素瘤是皮膚黑素細胞系統(tǒng)所發(fā)生的惡性程度最高的腫瘤之一。盡管近年來生物科學在各個領(lǐng)域迅猛發(fā)展，黑素瘤的臨床治療手段卻沒有根本的改進，死亡病例高達皮膚癌所致死亡的80％，因此深入分析黑素瘤的發(fā)病機制，探索有效的治療方案非常重要。以往的研究表明，黑素瘤的發(fā)生發(fā)展與孕激素相關(guān)子宮內(nèi)膜蛋白(progestagen-associatedendometrial protein，PAEP)表達量密切相關(guān)，但是其作用機理尚不明確。本研究擬對PAEP

2、促腫瘤發(fā)展的免疫機制進行分析和探索。
　　PAEP又稱為glycodelin，最早是從人類胎盤、羊水、懷孕期子宮蛻膜中發(fā)現(xiàn)并分離出的一種糖蛋白。大量的研究表明，它能夠抑制T細胞的免疫活性，對妊娠期母體免疫耐受的建立和HLA半相合胚胎植入起重要的調(diào)節(jié)作用。我們以往的研究發(fā)現(xiàn)PAEP基因在惡性黑素瘤組織和及體外培養(yǎng)的細胞系中高水平表達，對腫瘤細胞的遷移侵襲具有促進作用。鑒于腫瘤侵襲和胚胎植入的相似性，我們推測存在這種可能:高表達的PA

3、EP對T細胞具有負性調(diào)節(jié)作用，使得腫瘤細胞逃脫了免疫細胞的監(jiān)視和殺傷而迅速發(fā)生浸潤轉(zhuǎn)移。
　　為了證明這個假設，我們從以下三方面進行了研究:1.采用RT-PCR和Western blot檢測PAEP在黑素瘤細胞系中mRNA和蛋白的表達;2.利用化學合成的PAEP siRNA和PAEP shRNA重組慢病毒感染腫瘤細胞，下調(diào)PAEP的表達并通過藥物篩選獲得PAEP表達抑制的穩(wěn)定細胞系，為下一步實驗提供蛋白樣品及細胞模型;3.分離人外

4、周血單個核細胞及純化的CD8+T細胞，分別將PAEP蛋白或PAEP表達抑制的腫瘤細胞與淋巴細胞混合，與對照組相比觀察淋巴細胞的增殖、凋亡和腫瘤殺傷功能的變化。實驗結(jié)果顯示:1.分別從mRNA和蛋白水平證實了PAEP基因在黑素瘤細胞系的表達;2.PAEP siRNA顯著降低了PAEP mRNA的表達;通過慢病毒轉(zhuǎn)染獲得了PAEP表達抑制的穩(wěn)定細胞系及非靶向shRNA對照細胞;3.PAEP條件培養(yǎng)上清加入體外活化的淋巴細胞后，細胞增殖明顯變