壬二酸（AZA）的抗菌及對黑素細胞與黑素瘤細胞的抑制作用.pdf

1、目的：探討壬二酸的抗菌作用及其可能的作用機制，觀察不同培養(yǎng)條件下環(huán)境因素(營養(yǎng)與pH值)對壬二酸抗菌作用的影響，并比較環(huán)境因素的影響。觀察并檢測壬二酸對正常人表皮黑素細胞與鼠黑素瘤細胞形態(tài)、黑素合成功能的影響。觀察壬二酸誘導黑素瘤細胞凋亡的作用。 方法：(1)以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌為研究對象，檢測壬二酸作用后的細菌存活率及壬二酸的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)；觀察在不同pH值條件下和含不同的營養(yǎng)成

2、份的培養(yǎng)條件下，對壬二酸抗菌作用的影響；采用3H-TdR、3H-UdR和3H-PRO摻入法，觀察壬二酸對細菌DNA、RNA和蛋白質生物合成的抑制作用； (2)以惡性黑色素瘤鼠B16細胞株和人表皮黑素(MC)細胞作為研究對象，檢測壬二酸對B16細胞和MC細胞黑素含量和酪氨酸酶(tyrosinase)的影響；TRP-1染色觀察壬二酸作用后細胞形態(tài)變化； (3)MTT比色法檢測壬二酸對B16細胞的生長抑制作用；流式細胞術(FC

3、M)檢測壬二酸的促B16細胞凋亡作用；丫啶橙/溴化乙啶染色后，熒光顯微鏡下觀察腫瘤細胞的凋亡小體。 結果：(1)壬二酸對綠膿桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌均有抑制細菌生長的作用。2隨看壬二酸作用時間的延長，可見細菌存活率逐漸下降。壬二酸作用48h之后，對綠膿桿菌、大腸桿菌、金葡菌的最小抑菌濃度分別是0.25mol/L、0.125mol/L、0.063mol/L；對綠膿桿菌、大腸桿菌、金葡菌的最小殺菌濃度分別是0.25mol/L、

4、＞0.125mol/L、0.063mol/L。綠膿桿菌、大腸桿菌、金葡菌在不同培養(yǎng)液的營養(yǎng)條件和不同的pH值下，壬二酸作用后細菌的生長率均不同；在相同的營養(yǎng)條件下，不同pH值時對細菌生長率影響依次為pH7.0＞pH6.0＞pH5.6；在相同pH值的環(huán)境中，L-B培養(yǎng)液中的細菌生長率要大于磷酸鹽緩沖液中的細菌生長率；pH值對壬二酸抑菌作用的影響比營養(yǎng)因素更明顯。與空白對照組比較，5mmol/L的壬二酸可明顯抑制綠膿桿菌的DNA的合成(P＜

5、0.01)、大腸桿菌的蛋白質的合成(P＜0.01)；與空白對照組比較，50mmol/L的壬二酸可明顯抑制大腸桿菌、金葡菌的RNA的合成(P＜0.01)。 (2)壬二酸能顯著抑制鼠黑素瘤B16細胞和人表皮黑素細胞的酪氨酸酶活性和黑素的合成，而且呈濃度依賴性；與空白對照組比較，0.1mmol/L的壬二酸即顯示抑制人表皮黑素細胞的酪氨酸酶活性和黑素的合成(P＜0.01)；相同濃度的壬二酸對B16細胞的酪氨酸酶活性和黑素合成也有抑制作用

6、(P＜0.05)，與陽性對照0.5μmol/L氫醌相比，0.5mmol/L壬二酸的作用顯著高于氫醌(P＜0.05)。壬二酸作用人表皮黑素細胞72h后，可見細胞樹突減少，正常表皮黑素細胞樹突多為3～5極，多的可達10極，而藥物作用后，可見細胞樹突減少至1～3極；而壬二酸作用于鼠黑色素瘤B16細胞72h后，細胞形態(tài)無明顯改變。 (3)壬二酸對B16細胞生長的抑制作用呈時間和濃度依賴性。與空白對照組比較，0.1mmol/L的壬二酸作用

7、于B16細胞24h后，差異無顯著性(P＞0.05)，而1.0mmol/L的壬二酸對B16細胞的生長抑制作用較明顯，差異有顯著性(P＜0.05)，同一濃度的壬二酸作用于B16細胞不同時間，差異也具有顯著性(P＜0.05)，高濃度(10mmol/L)時，B16細胞出現(xiàn)壞死；壬二酸濃度在5mmol/L時，熒光顯微鏡下可見明顯的凋亡細胞；流式細胞術(FCM)檢測顯示細胞周期G1前出現(xiàn)凋亡峰，且隨著藥物濃度的增加，其平均凋亡指數(shù)逐漸增加。

8、 結論：(1)壬二酸可以抑制綠膿桿菌、大腸桿菌、金葡菌的生長，較高濃度時具有殺菌作用。其抑菌作用與營養(yǎng)和pH值有關，營養(yǎng)缺乏的條件下，壬二酸的抑菌率下降，pH值改變對壬二酸的抑菌作用的影響更為顯著； (2)壬二酸作用于人表皮黑素細胞后，細胞樹突由原來的3～5個變?yōu)?～2個。但對于惡性黑素瘤細胞形態(tài)改變影響較小。壬二酸可以降低表皮黑素細胞及黑素瘤細胞的酪氨酸酶活性和黑素合成，且具有濃度依賴性； (3)壬二酸抑制黑素瘤細胞的