高表達Foxp3的肺癌細胞對T淋巴細胞抗腫瘤效應的抑制作用.pdf

1、背景：近年來惡性腫瘤的發(fā)病率越來越高,嚴重威脅人類的健康。腫瘤的形成及轉(zhuǎn)移是一個復雜的多階段連續(xù)過程,受多種因素的影響,而腫瘤細胞能否逃逸免疫系統(tǒng)的監(jiān)視是影響腫瘤形成和發(fā)展的主要原因之一。機體免疫系統(tǒng)通過免疫監(jiān)視作用識別、控制并最終消滅腫瘤,而腫瘤細胞可通過不明機制逃逸免疫系統(tǒng)的監(jiān)視而生存。因此,腫瘤免疫逃逸機制一直是腫瘤研究的重要內(nèi)容,但是目前沒有重大進展。
　　調(diào)節(jié)性T細胞(Regulatory T cells, Treg)具

2、有免疫抑制功能,其介導的免疫調(diào)節(jié)作用是維持自身免疫耐受的關鍵。Treg細胞可以通過細胞之間直接接觸,也可以通過分泌免疫抑制因子IL-10及IL-35等發(fā)揮其調(diào)節(jié)功能,如IL-10抑制效應T細胞的活性,IL-35抑制T細胞的增殖等,而IL-10及IL-35的表達則受Foxp3的調(diào)控。近年來的研究發(fā)現(xiàn)Foxp3是Treg細胞的標志性分子,Foxp3是一種轉(zhuǎn)錄抑制因子,其對目的基因主要發(fā)揮負向調(diào)節(jié)作用,在Treg細胞的發(fā)育及功能維護方面起關鍵

3、作用。
　　由于Treg細胞在自身免疫調(diào)控中有關鍵性的作用,人們開始關注腫瘤細胞是否通過Treg細胞抑制免疫功能從而主動逃避免疫監(jiān)視。研究結(jié)果表明,Treg細胞的確與腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移有密切關系。研究者在人結(jié)腸癌、肝癌、乳腺癌、膀胱癌等腫瘤組織內(nèi)都發(fā)現(xiàn)了高比率的Treg細胞,而且發(fā)現(xiàn)在非小細胞肺癌、胰腺癌以及前列腺癌中Treg細胞與腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移呈正相關。這些研究結(jié)果說明,可能正是腫瘤組織存在和聚集的Treg細胞使腫瘤細胞可以逃避

4、免疫系統(tǒng)的監(jiān)視最終形成腫瘤。
　　最近研究發(fā)現(xiàn),一些高表達Foxp3的腫瘤細胞具有類似于Treg細胞的免疫抑制作用,如人淋巴瘤細胞及胰腺癌細胞抑制T細胞增殖等。我們的初步研究也得到類似的結(jié)果,在一些腫瘤細胞如腫瘤細胞株(PC-3, MDA-MB-231, NCI-H157, NCI-H727等)中都不同程度地表達Foxp3,以前列腺癌細胞株(PC-3)及肺癌細胞株(NCI-H727)表達水平最高。
　　這些發(fā)現(xiàn)提示我們Fox

5、p3可能賦予腫瘤細胞主動防御的能力,從而使Foxp3陽性腫瘤細胞可以主動影響免疫監(jiān)視。因此,本實驗要進一步探討Foxp3具體賦予腫瘤細胞哪些能力和特性,使腫瘤細胞以何種方式和途徑影響機體免疫系統(tǒng)從而逃脫免疫監(jiān)視,為腫瘤治療和預防提供指導策略,同時也有助于抗腫瘤藥物的研發(fā)。
　　目的：研究轉(zhuǎn)錄因子Foxp3在肺癌細胞中的高表達對T淋巴細胞的免疫抑制作用,為腫瘤治療及藥物開發(fā)提供理論基礎。
　　方法：利用脂質(zhì)體介導的轉(zhuǎn)染方法建立

6、穩(wěn)定高表達Foxp3的NCIH-1299肺癌細胞株,作為高表達Foxp3的陽性細胞,同時用pcDNA3空載體轉(zhuǎn)染NCIH-1299細胞,作為陰性對照。ELISA方法檢測轉(zhuǎn)染細胞中IL-8、IL-10等細胞因子表達量的變化;檢測T淋巴細胞和轉(zhuǎn)染細胞共培養(yǎng)后IL-2表達量的變化。MTT法評價轉(zhuǎn)染細胞增殖能力的改變;觀察轉(zhuǎn)染細胞與T淋巴細胞共培養(yǎng)時T細胞對轉(zhuǎn)染細胞增殖的影響;觀察T細胞對轉(zhuǎn)染細胞的細胞殺傷作用。免疫細胞化學法觀察轉(zhuǎn)染細胞與T淋

7、巴細胞的相互作用。建立移植瘤小鼠模型,觀察Foxp3在小鼠成瘤中的作用。
　　結(jié)果：成功建立高表達Foxp3的NCIH-1299肺癌細胞株;與陰性對照相比,高表達Foxp3的細胞IL-8表達量減低,IL-10表達量升高,且與T細胞共培養(yǎng)時抑制T細胞IL-2的表達。MTT法和免疫細胞化學方法檢測到Foxp3的高表達抑制T細胞的增殖和侵潤。利用移植瘤小鼠模型觀察到Foxp3的高表達促進腫瘤形成和腫瘤的生長。
　　結(jié)論：