破壁靈芝孢子粉對小鼠T細胞淋巴瘤的抑制作用.pdf

1、目的：
　　 以小鼠T細胞淋巴瘤細胞株EL-4為模型，研究靈芝孢子粉對EL-4細胞生長的抑制作用；建立MNU誘導小鼠胸腺T細胞淋巴瘤的裸鼠移植瘤模型，利用裸鼠移植瘤研究靈芝孢子粉對胸腺T細胞淋巴瘤的抑制作用并初步探討其作用機制。
　　 方法：
　　 1.第一部分，研究靈芝孢子粉體外對EL-4細胞的抑制作用：(1)用MTT法研究破壁靈芝孢子粉5 g/L、2.5 g/L、1.25 g/L、0.625 g/L、0.31

2、25 g/L五個不同濃度下，對EL-4細胞的抑制作用。(2)應用透射電鏡技術檢測靈芝孢子粉對EL-4細胞凋亡的誘導作用。(3)用RT-PCR技術檢測靈芝孢子粉作用后EL-4細胞Bax、Bcl-2、Bcl-xl基因mRNA表達水平的改變。
　　 2.第二部分，胸腺T細胞淋巴瘤裸鼠移植瘤模型的建立
　　 建立MNU誘導胸腺T細胞淋巴瘤裸鼠移植瘤模型，并將腫瘤在裸鼠體內連續(xù)傳代，取第四代裸鼠腋下腫瘤進行HE染色及免疫組化染色，

3、鑒定此腫瘤與模型一致，建立穩(wěn)定的裸鼠移植瘤。
　　 3.第三部分，研究靈芝孢子粉對胸腺T細胞淋巴瘤裸鼠移植瘤的抑制作用并初步探討其作用機制。采用隨機區(qū)組設計法隨機分為空白組、陽性組及靈芝孢子粉高、中、低劑量組?？瞻捉M腹腔注射生理鹽水，陽性組腹腔注射環(huán)磷酰胺，靈芝孢子粉組分高、中、低劑量組(分別為高劑量4g/kg、中劑量2.1g/kg、低劑量1.05g/kg)，灌胃給藥。(1)觀察裸鼠的活動情況及皮下瘤的生長，給藥21天后處死，取

4、瘤組織稱重，計算抑瘤率。按公式V=ab2/2(mm3)計算腫瘤體積。(2)取高劑量組及生理鹽水組做病理觀察，采用蘇木精一伊紅(HE)染色法觀察腫瘤組織結構、細胞壞死和細胞形態(tài)改變。(3)電鏡觀察凋亡細胞形態(tài)。
　　 結果：
　　 1.(1)MTT實驗結果顯示，靈芝孢子粉對EL-4細胞的生長具有明顯抑制作用，并且抑制率隨時間及劑量的增加而升高，具有一定的時間和劑量效應關系。濃度為5g/l時，作用時間為48h、7h2、96h

5、后，靈芝孢子粉對EL-4細胞生長的抑制率分別是35.5％、48.1％、40.0％。靈芝孢子粉對EL-4細胞的IC50值隨作用時間增加而減小，72h達到最低，為4.76g/l。(2)透射電鏡結果顯示，靈芝孢子粉可誘導EL-4細胞凋亡。(3)RT-PCR顯示，以5g/l靈芝孢子粉處理EL-4細胞48小時后，Bax基因的mRNA表達明顯上調，Bcl-2、Bcl-xl基因的mRNA表達稍下調。
　　 2.裸鼠移植瘤的鑒定 HE染色表現(xiàn)為

6、彌漫的中等大小的淋巴樣細胞，胞質較少，核圓形或橢圓形，染色質細膩，核分裂象多見，少見星空現(xiàn)象。免疫組化顯示瘤細胞表達CD3和TDT。與我們前期利用MNU誘導的T細胞淋巴瘤細胞一致。
　　 3.裸鼠移植瘤實驗顯示，(1)靈芝孢子粉給藥劑量為4g/kg(高劑量組)、2.1g/kg(中劑量組)和1.05g/kg(低劑量組)時，對裸鼠移植瘤的抑制率分別為45.8％、37.5％和25.0％，其中高劑量組、中劑量組與生理鹽水組比較均有顯著差

7、異(P＜0.01)。(2)腫瘤組織切片，HE染色后鏡下觀察，靈芝孢子粉高劑量組與生理鹽水對照組相比，腫瘤壞死區(qū)域較大，核碎屑、細胞固縮較多。(3)透射電鏡結果顯示，靈芝孢子粉可誘導T細胞淋巴瘤細胞凋亡。
　　 結論：
　　 (1)靈芝孢子粉在體外可抑制小鼠T細胞淋巴瘤EL-4細胞株的增殖并誘導其凋亡，可能機制是通過上調Bax mRNA，下調Bcl-2、Bcl-xl mRNA表達實現(xiàn)的。
　　 (2)靈芝孢子粉對裸